Anti-CHAT polyklonaler Antikörper für WB, IHC, IF, ELISA – P28329

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der Cholin-O-Acetyltransferase

• Die Cholin-O-Acetyltransferase (CHAT, auch als CHOACTASE bekannt) ist das Enzym, das für die Synthese des Neurotransmitters Acetylcholin aus Acetyl-CoA und Cholin verantwortlich ist.
• CHAT katalysiert die reversible Reaktion an cholinergen Synapsen und spielt eine entscheidende Rolle bei der Neurotransmission sowohl im zentralen als auch im peripheren Nervensystem.
• Als Schlüsselenzym der Acetylcholin-Biosynthese ist CHAT für die Funktion cholinerger Neuronen essenziell und an der neuromuskulären Signalübertragung beteiligt.
• Mutationen im CHAT-Gen stehen mit dem kongenitalen myasthenischen Syndrom (CMS) in Verbindung, einer Gruppe neuromuskulärer Erkrankungen, die durch eine gestörte Signalübertragung an der neuromuskulären Synapse gekennzeichnet sind.
• CHAT unterliegt einem alternativen Spleißen, wodurch mehrere Isoformen entstehen können, die möglicherweise gewebespezifische Expressionsmuster aufweisen.
• Das Protein wird phosphoryliert, was auf mögliche regulatorische Funktionen bei der Enzymaktivität durch posttranslationale Modifikationen hindeutet.
• CHAT wird als Acyltransferase und Transferase klassifiziert und gehört zu einer Enzymfamilie, die funktionelle Gruppen auf Substrate überträgt.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 331–630 des humanen CHAT, einer Region, die wahrscheinlich bei Mensch, Maus und Ratte konserviert ist und somit die Angaben zur Kreuzreaktivität unterstützt.
• Für den Western Blot (WB) sollten denaturierende/reduzierende Bedingungen in Betracht gezogen werden. Es wird eine vorherrschende Bande bei etwa 83 kDa erwartet, entsprechend dem CHAT-Protein voller Länge. Die Validierung sollte mit Lysaten aus positiven Kontrollen von menschlichem, murinem oder Rattenhirngewebe erfolgen.
• Bei Anwendungen in der Immunfluoreszenz (IF/ICC oder IF-P) und Immunhistochemie (IHC-P) sollte die Antikörperleistung an fixierten und permeabilisierten Zellen oder Gewebeschnitten getestet werden. Die Einbeziehung negativer Kontrollen (z. B. CHAT-Knockout- oder depletierte Proben) wird empfohlen.
• Bei der Verwendung in ELISA kann die polyklonale Natur ein verstärktes Signal liefern. Für quantitative Assays sollte jedoch die Chargenkonsistenz überprüft werden.
• Um die Spezifität zu maximieren, wird Forschern empfohlen, den Antikörper für ihre spezifischen Assaysysteme zu titrieren und die Ergebnisse mit sekundären Nachweisreagenzien zu bestätigen, die für Kaninchen-IgG optimiert sind.

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