Anti-CFI polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - P05156

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CFI-Funktion und -Lokalisation

• CFI ist eine Trypsin-ähnliche Serinprotease, die alle Komplementwege negativ reguliert, indem sie die Alpha-Ketten von C3b und C4b spaltet und damit diese wichtigen Opsonine inaktiviert.
  Verwandte Referenzen: PMID:17320177 PMID:7360115
• Sie benötigt für ihre Aktivität Kofaktoren, darunter Faktor H und C4BP in der flüssigen Phase sowie Membran-Kofaktor-Protein (CD46) und Komplementrezeptor 1 (CR1) auf Zelloberflächen.
  Verwandte Referenzen: PMID:12055245 PMID:2141838 PMID:9605165
• Auf gesunden Wirtszellen verhindert die CFI-vermittelte Degradation von abgelagertem C3b die autologe Komplementaktivierung, während auf apoptotischen Zellen oder Mikroben, die schützende Kofaktoren fehlen, C3b aktiv bleibt, um Opsonisierung und Clearance zu fördern.
  Verwandte Referenzen: PMID:28671664
• CFI wird primär in der Leber von Hepatozyten exprimiert, kommt aber auch in Monozyten, Fibroblasten und Keratinozyten vor.
  Verwandte Referenzen: PMID:6327681 PMID:17320177 PMID:6444659
• Das Protein wird in den extrazellulären Raum sezerniert und zirkuliert im Blut, wo es seine regulatorische Funktion in der flüssigen Phase und auf Zelloberflächen ausübt.
• CFI enthält Disulfidbrücken, Glykosylierungsstellen und Kalzium-bindende Motive; es wird unter Serinproteasen klassifiziert und ist an der angeborenen Immunität beteiligt. Mutationen sind mit altersbedingter Makuladegeneration und hämolytisch-urämischem Syndrom assoziiert.
• Das Protein hat eine vorhergesagte Molekülmasse von ~66 kDa und unterliegt N-verknüpfter Glykosylierung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (aa 19-300) umfasst den N-terminalen Teil des humanen CFI und erkennt wahrscheinlich sowohl pro-CFI als auch die reife schwere Kette; dies sollte bei der Interpretation von Bandenmustern berücksichtigt werden.
• Für Western Blot beträgt die empfohlene Startverdünnung typischerweise 1:500–1:2000; unter reduzierenden Bedingungen sollte eine erwartete Bande nahe 66 kDa beobachtet werden, mit möglichen zusätzlichen Banden durch Glykosylierung oder Prozessierung.
• Für ELISA müssen die Testbedingungen optimiert werden; der Antikörper kann für die Antigen-Erfassung oder -Detektion verwendet werden, aber bei Verwendung eines Sandwich-Formats sollte die Paarung mit einem komplementären Antikörper validiert werden.
• Bei der Analyse von Mausproben sollte die Reaktivität überprüft werden; obwohl Kreuzreaktivität angegeben ist, kann die Signalintensität von der des humanen CFI abweichen.
• Immer geeignete positive und negative Kontrollen einschließen, wie z. B. Lysate von CFI-exprimierenden Zellen (z. B. hepatoxyten-abgeleitete Zelllinien) und CFI-depletiertes Serum.

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