Anti-CD95-Kaninchen-monoklonaler Antikörper für ELISA, FC – P25446

Wesentliche Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD95

• CD95 (FAS, Apo-1) ist ein Mitglied der Tumornekrosefaktor-Rezeptor-Superfamilie und ein Transmembranprotein, das nach Bindung an seinen Liganden FASLG die Apoptose vermittelt.
• Die intrazelluläre Todesdomäne des Rezeptors rekrutiert FADD und Caspase-8 und bildet dadurch den DISC-Komplex (death-inducing signaling complex), der apoptotische Kaskaden auslöst.
• Die durch FAS vermittelte Apoptose ist entscheidend für die periphere Toleranz und den antigenstimulierten Zelltod reifer T-Zellen.
• CD95 ist in der Zellmembran und in Membran-Rafts lokalisiert und wird in verschiedenen murinen Geweben exprimiert, darunter Thymus, Leber, Lunge, Herz und Ovarien adulter Tiere.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Glykosylierung, Lipidierung (Palmitat) und Phosphorylierung; das Protein enthält Disulfidbrücken und ein Signalpeptid.
• Das reife Protein hat ein vorhergesagtes Molekulargewicht von etwa 37 kDa, das unter reduzierenden Bedingungen aufgrund der Glykosylierung höher erscheinen kann.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen (AS 22–169) umfasst die extrazelluläre Domäne, wodurch sich dieser Antikörper für den Nachweis von CD95 an der Zelloberfläche unter nativen und denaturierenden Bedingungen eignet.
• Für ELISA sollte eine Beschichtung mit einem rekombinanten CD95-Fc-Fusionsprotein oder die Verwendung von Zelllysaten in Betracht gezogen werden; als Ausgangspunkt sollte der Antikörper im Bereich von 0,1–1 µg/ml titriert werden.
• Verwenden Sie bei der Durchflusszytometrie 0,5–2 µg pro 10^6 Zellen; geeignete Isotypkontrollen und Blockierungsschritte sollten einbezogen werden, um eine unspezifische Bindung zu minimieren.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität mithilfe von CD95-Knockout-Mausmodellen oder Zelllinien, um die Erkennung des Zielmoleküls zu bestätigen.
• Beachten Sie, dass die endogenen CD95-Expressionsniveaus zwischen Geweben und Aktivierungszuständen variieren; Vorversuche werden empfohlen.

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