Polyklonaler Anti-CD8A-Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – P01732

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD8A

• CD8A kodiert die Alpha-Kette des T-Zell-Oberflächenglykoproteins CD8, auch bekannt als T8/Leu-2, das als Korezeptor für MHC-Klasse-I-Moleküle fungiert. Das CD8-Protein liegt entweder als disulfidverknüpftes Heterodimer aus den Ketten Alpha/CD8A und Beta/CD8B oder, seltener, als CD8A-Homodimer vor.
• CD8A ist für die Immunantwort essenziell. In T-Zellen interagiert es mit dem T-Zell-Rezeptor (TCR) und MHC-Klasse-I:Peptid-Komplexen auf antigenpräsentierenden Zellen und rekrutiert die Src-Kinase LCK, um Signalwege einzuleiten, die zur Aktivierung, Proliferation und Differenzierung von T-Zellen zu zytotoxischen T-Lymphozyten (CTLs) führen.
• CD8A ermöglicht es CTLs, infizierte und Tumorzellen zu erkennen und zu eliminieren. Die durch die CD8A-LCK-Phosphorylierung ausgelöste intrazelluläre Signalkaskade fördert die Lymphokinproduktion, Motilität, Adhäsion und Lyse von Zielzellen.
• Auf natürlichen Killerzellen (NK-Zellen) stellen CD8A-Homodimere einen Überlebensmechanismus bereit, der die Konjugation mit mehreren Zielzellen und deren Lyse erleichtert. CD8A-Homodimere unterstützen außerdem das Überleben und die Differenzierung aktivierter Lymphozyten zu CD8+-Gedächtnis-T-Zellen.
• CD8A wird auf aus dem Thymus stammenden T-Zellen, einer Untergruppe von NK-Zellen, Gedächtnis-T-Zellen, intraepithelialen Lymphozyten, Monozyten und dendritischen Zellen exprimiert. Seine Expression kann in plasmazytoiden dendritischen Zellen nach Stimulation mit dem Herpes-simplex-Virus-1 induziert werden.
• Das Protein ist ein integrales Membran-Glykoprotein mit einer einfach durchspannenden Transmembrandomäne und einer durch alternatives Spleißen erzeugten sezernierten Form. Es enthält eine immunglobulinähnliche Domäne und wird durch Disulfidbrücken, Palmitoylierung und N-Glykosylierung modifiziert.
• Mit CD8A verbundene Schlüsselwörter umfassen adaptive Immunität, alternatives Spleißen, Zellmembran, Krankheitsvariante (mit Beteiligung an Immundefizienz), Disulfidbindung, Glykoprotein, Immunglobulindomäne, Lipoprotein, Palmitat, sezerniert und Transmembranhelix.
• Das Molekulargewicht des reifen Proteins beträgt ungefähr 25,7 kDa und stimmt mit der unter reduzierenden Bedingungen in der Western-Blot-Analyse beobachteten Bandengröße von 26 kDa überein.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das zur Erzeugung dieses polyklonalen Antikörpers verwendete Immunogen entspricht den Aminosäuren 22–182 des humanen CD8A und umfasst die extrazelluläre immunglobulinähnliche Domäne. Dieser Bereich ist höchstwahrscheinlich auf der Zelloberfläche zugänglich, wodurch sich der Antikörper für Anwendungen zur Erkennung des nativen Proteins eignet.
• Beim Western Blot (WB) wird eine Bande bei ungefähr 26 kDa erwartet. Der Antikörper kann sowohl glykosylierte als auch unglykosylierte Formen nachweisen. Zur Auflösung des Monomers werden reduzierende Bedingungen empfohlen.
• Für die Immunhistochemie an paraffineingebetteten Schnitten (IHC-P) sollten optimale Bedingungen für die Antigen-Retrieval-Methode (z. B. Citratpuffer, pH 6,0) empirisch bestimmt werden. Die polyklonale Natur kann eine starke Signalverstärkung ermöglichen, jedoch auch den Hintergrund erhöhen; die Blockierungsschritte sollten optimiert werden.
• Als polyklonaler Antikörper erkennt er mehrere Epitope, was für ELISA-Assays von Vorteil sein kann, da er potenziell sowohl als Fang- als auch als Nachweisreagenz eingesetzt werden kann. Die Kreuzadsorption gegen Mausproteine gewährleistet die Reaktivität mit murinem CD8A und erweitert damit seine Einsatzmöglichkeiten in Studien mit Mausmodellen.

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