Anti-CD73/NT5E-Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA – P21589

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD73/NT5E

• CD73/NT5E kodiert die Ekto-5'-Nukleotidase, ein durch Glykosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Membranprotein, das die Hydrolyse extrazellulärer Nukleotidmonophosphate zu den entsprechenden Nukleosiden und anorganischem Phosphat katalysiert.
• Katalysiert die Hydrolyse von AMP zu Adenosin und anorganischem Phosphat, wobei Ribonukleotidmonophosphate gegenüber Desoxyriboseformen bevorzugt werden (PubMed:21933152, PubMed:22997138, PubMed:23142347, PubMed:34403084). Verwandte Referenzen:
• PMID:21933152
• PMID:22997138
• PMID:23142347
• PMID:34403084
• Zeigt eine breite Substratspezifität, einschließlich IMP, UMP, GMP, CMP, dAMP, dCMP, dTMP, NAD und NMN (PubMed:21933152, PubMed:22997138, PubMed:23142347). Verwandte Referenzen:
• PMID:21933152
• PMID:22997138
• PMID:23142347
• Über einen C-terminalen GPI-Anker an der Zellmembran lokalisiert, wodurch die aktive Stelle extrazellulär positioniert wird, um die purinerge Signalübertragung und Immunantworten zu regulieren.
• Benötigt Zink als Kofaktor für die katalytische Aktivität; das Enzym enthält ein zweikerniges Zinkzentrum, das für die Phosphathydrolyse essenziell ist.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören die N-glykosylierung und die Bildung von Disulfidbrücken, die zur Stabilität und Funktion des Proteins beitragen.
• Genetische Varianten in NT5E stehen mit einer arteriellen Verkalkung infolge eines CD73-Mangels (ACDC) in Verbindung, einer seltenen autosomal-rezessiven Erkrankung.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Resten 27–377 des humanen NT5E und umfasst damit den Großteil der extrazellulären Domäne; dieses Design begünstigt den Nachweis von CD73 auf der Zelloberfläche in seiner nativen Konformation.
• Für den Western Blot (WB) sollte ein Verdünnungsbereich von 1:500–1:2000 in Betracht gezogen werden. Beachten Sie, dass das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 63 kDa beträgt; unter reduzierenden Bedingungen können glykosylierte Formen etwas höher erscheinen.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) ist eine Antigen-Retrieval-Behandlung mit Citratpuffer (pH 6,0) häufig vorteilhaft; validieren Sie den Antikörper an einer Auswahl positiver und negativer Kontrollgewebe.
• Eine Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte wurde nachgewiesen. Aufgrund artspezifischer Sequenzvariationen sollten die optimalen Arbeitsverdünnungen jedoch für jeden Assay empirisch bestimmt werden.
• Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, kann die Chargenkonsistenz variieren. Wir empfehlen, jede neue Charge zu titrieren und in jedes Experiment geeignete positive und negative Kontrollen einzubeziehen.
• Für ELISA können sowohl die direkte Beschichtung mit dem rekombinanten Protein als auch Capture-Detection-Formate getestet werden; führen Sie Schachbretttitrationen durch, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren.

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