Anti-CD68 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P34810

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: CD68-Funktion und Lokalisierung

• CD68, auch bekannt als Makrosialin, GP110, LAMP4 oder SCARD1, ist ein stark glykosyliertes transmembranes Glykoprotein aus der LAMP-Familie.
• Es wird hauptsächlich auf der Membran von Endosomen und Lysosomen exprimiert, kann aber auch schnell zur Zelloberfläche recycelt werden, was auf eine Rolle bei Adhäsion und zellulärer Motilität hindeutet.
• CD68 wirkt bei den phagozytischen Aktivitäten von Makrophagen mit und ist sowohl am intrazellulären lysosomalen Stoffwechsel als auch an extrazellulären Zell-Zell- und Zell-Pathogen-Interaktionen beteiligt.
• Durch Bindung an gewebe- und organspezifische Lektine oder Selektine erleichtert CD68 die Homing von Makrophagen-Subpopulationen zu spezifischen anatomischen Stellen.
• Das Protein enthält eine Mukin-ähnliche Domäne, die wahrscheinlich an der Ligandenbindung beteiligt ist und die Anheftung an Selektine auf Endothelzellen vermitteln kann, was die Ausbreitung von Makrophagen und Tumorzellen unterstützt.
• CD68 wird stark in Blutmonozyten und Gewebemakrophagen exprimiert und kommt auch in Lymphozyten, Fibroblasten, Endothelzellen und verschiedenen Tumorzelllinien vor.
• Mehrere posttranslationale Modifikationen, einschließlich N-verknüpfter Glykosylierung und Disulfidbrücken, tragen zu seiner strukturellen Stabilität und der Verschiebung des Molekulargewichts auf etwa 110 kDa (die reife glykosylierte Form) bei, obwohl das vorhergesagte Kernprotein etwa 37 kDa beträgt.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen, die möglicherweise unterschiedliche Funktionen oder Expressionsmuster aufweisen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (rekombinantes Protein entsprechend den Aminosäuren 16–200) zielt auf die N-terminale extrazelluläre Region; der Antikörper kann sowohl das Kernprotein als auch die reife glykosylierte Form erkennen.
• Für Western Blot (WB) ist es ratsam, sowohl reduzierende als auch nicht-reduzierende Bedingungen zu testen, und zu beachten, dass das beobachtete Band je nach Probe und experimentellen Bedingungen zwischen 37 kDa (Kernprotein) und 110 kDa (glykosylierte Form) wandern kann.
• Für Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) ist ein Färbemuster zu erwarten, das mit Endosomen, Lysosomen und der Zellmembran übereinstimmt; Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle sollten für den Zelltyp optimiert werden.
• Für ELISA-Anwendungen können geeignete Beschichtungs- und Blockierungsbedingungen erforderlich sein; für Sandwich-Assays sollte die Kombination mit einem geeigneten Detektionsantikörper in Betracht gezogen werden.
• Validieren Sie den Antikörper in den relevanten Spezies (Human, Maus, Ratte) und geeigneten Positivkontrollproben, wie z. B. Makrophagen-Zelllinien (z. B. THP-1, RAW 264.7) oder peripheren mononukleären Blutzellen.

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