Anti-CD68 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IF-P, IHC-P, ELISA - P34810

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD68-Funktion und -Lokalisierung

• CD68, auch bekannt als Makrosialin, GP110, LAMP4 oder SCARD1, ist ein stark glykosyliertes Typ-I-Transmembranprotein, das zur Familie der lysosomalen/endosomenassoziierten Membranglykoproteine (LAMP) gehört. Es enthält eine Mucin-ähnliche Domäne und eine Transmembranhelix.
• Alternatives Spleißen des CD68-Gens erzeugt mehrere Isoformen, die zur funktionellen Vielfalt in verschiedenen Zelltypen oder zellulären Kompartimenten beitragen können.
• CD68 spielt eine zentrale Rolle bei den phagozytischen Aktivitäten von Gewebsmakrophagen und ist sowohl am intrazellulären lysosomalen Stoffwechsel als auch an extrazellulären Zell-Zell- und Zell-Pathogen-Interaktionen beteiligt. Es bindet an gewebe- und organspezifische Lektine oder Selektine, wodurch die Homing von Makrophagen-Subsets an bestimmte Stellen erleichtert wird.
• Das Protein durchläuft ein schnelles Recycling zwischen Endosomen, Lysosomen und der Zellmembran, ein dynamischer Prozess, der es Makrophagen ermöglichen könnte, über Selektin-haltige Substrate oder andere Zellen zu kriechen.
• Subzellulär lokalisiert CD68 hauptsächlich an der Zellmembran, der Endosomenmembran und der Lysosomenmembran, was mit seinen Rollen im vesikulären Transport und der Oberflächenadhäsion übereinstimmt.
• CD68 wird stark in Blutmonozyten und Gewebsmakrophagen exprimiert. Es kommt auch, in geringerem Maße, in Lymphozyten, Fibroblasten, Endothelzellen und zahlreichen Tumorzelllinien vor. In Tumoren kann die CD68-Expression die Selektin-vermittelte Adhäsion an das vaskuläre Endothel fördern und möglicherweise die metastatische Ausbreitung unterstützen.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen umfangreiche N- und O-gebundene Glykosylierungen, die dafür verantwortlich sind, dass das scheinbare Molekulargewicht des Proteins auf der SDS-PAGE höher ist als die vorhergesagten 37 kDa. Das Protein enthält auch Disulfidbindungen und ein Signalpeptid.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das verwendete Immunogen ist ein synthetisches Peptid (aa 100-200 von humanem CD68), was darauf hindeutet, dass der Antikörper ein lineares Epitop erkennt. Für Western Blotting sollten Standard-Reduktions- und Denaturierungsbedingungen geeignet sein; aufgrund der starken Glykosylierung kann das beobachtete Band jedoch oberhalb der vorhergesagten 37 kDa wandern. Erwägen Sie bei Bedarf den Einsatz von Deglykosylierungsenzymen, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für Immunfluoreszenz an Paraffin-eingebetteten Schnitten (IF-P) und Immunhistochemie (IHC-P) wird eine Antigen-Demaskierung empfohlen, da CD68 ein Membranprotein ist, das oft in intrazellulären Kompartimenten lokalisiert ist. Optimieren Sie die Fixierung (z.B. 4% PFA oder Formalin) und Permeabilisierung, um den Zugang zum Epitop in Endosomen/Lysosomen sicherzustellen.
• Wenn Sie diesen Antikörper in ELISA verwenden, validieren Sie die Leistung gegen rekombinantes CD68-Protein oder Lysate von CD68-exprimierenden Zelllinien (z.B. THP-1 Monozyten/Makrophagen), um Empfindlichkeit und Spezifität zu bestätigen.
• Da CD68 ein Marker für Makrophagen ist, sollten Sie in allen Experimenten geeignete positive (z.B. humane Makrophagen-Lysate) und negative (z.B. CD68-Knockout-Proben oder Isotypenkontrollen) Kontrollen einschließen, um die Zielspezifität zu überprüfen.

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