Anti-CD68 Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für WB, IF-P, FC (intra), ELISA - P34810

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD68-Funktion und Lokalisierung

• CD68, auch bekannt als Makrosialin, GP110, LAMP4 und SCARD1, ist ein stark glykosyliertes Typ-I-Transmembranprotein aus der Familie der lysosomen-assoziierten Membranproteine (LAMP).
• Es ist vorwiegend in Endosomen- und Lysosomenmembranen lokalisiert, kann aber zur Zelloberfläche recycelt werden, was eine schnelle Präsentation in der Plasmamembran von Makrophagen ermöglicht.
• Das Protein spielt eine entscheidende Rolle bei der Phagozytose, vermittelt den intrazellulären lysosomalen Stoffwechsel von aufgenommenem Material und beteiligt sich an extrazellulären Interaktionen mit Pathogenen und anderen Zellen.
• CD68 bindet an gewebe- und organspezifische Lektine oder Selektine, was die Ansiedlung von Makrophagen-Subpopulationen an bestimmten anatomischen Stellen erleichtert und die Adhäsion und Migration von Makrophagen unterstützt.
• Man nimmt an, dass das schnelle Recycling von CD68 von Endosomen und Lysosomen zur Plasmamembran Makrophagen dabei hilft, über Substrate oder andere Zellen zu kriechen, die Selektine tragen.
• Obwohl CD68 stark in Blutmonozyten und Gewebemakrophagen exprimiert wird, wird es auch in Lymphozyten, Fibroblasten, Endothelzellen und vielen Tumorzelllinien nachgewiesen, wo es durch Bindung an vaskuläre Selektine die Tumorzellausbreitung fördern kann.
• Das Protein besitzt mehrere N-terminale Mucin-ähnliche Domänen, eine einzelne Transmembranhelix und einen kurzen cytoplasmatischen Schwanz, mit umfangreicher N- und O-Glykosylierung und mehreren intramolekularen Disulfidbrücken.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Reste 100–200 von humanem CD68 (NP_001242.2) umfasst. Die Sequenzerhaltung in dieser Region ist wahrscheinlich die Grundlage für die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte.
• Für den Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht des unglykosylierten Rückgrats ~37 kDa, aber stark glykosylierte Formen laufen oft bei höheren scheinbaren Molekulargewichten (80–110 kDa). Angemessenes Blockieren und Molekulargewichtsmarker werden empfohlen.
• Bei Immunfluoreszenz (IF-P) und intrazellulärer Durchflusszytometrie (FC) ist Permeabilisierung essentiell, da CD68 hauptsächlich in endosomalen und lysosomalen Kompartimenten lokalisiert ist; die Oberflächenfärbung erfordert die Berücksichtigung der Recycling-Dynamik.
• Die ELISA-Leistung hängt von der Epitopzugänglichkeit ab; Matrixeffekte und Beschichtungsbedingungen sollten optimiert werden, da starke Glykosylierung die Antikörperbindung maskieren oder verändern kann.
• Angesichts der breiten Expression in der Monozyten/Makrophagen-Linie sollten relevante positive Kontrollen (z.B. THP-1- oder RAW 264.7-Zellen) und Isotypkontrollen eingeschlossen werden, um die Spezifität im gewünschten Proben-System zu bestätigen.

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