Anti-CD64 Kaninchen-Monoklonalantikörper für WB, ELISA - P12314

Kernprodukt-Spezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: CD64-Funktion und Lokalisierung

• CD64, auch bekannt als FcγRI, ist der hochaffine Rezeptor für den Fc-Bereich von Immunglobulin Gamma (IgG). Er wird beim Menschen durch das FCGR1A-Gen kodiert und gehört zur Immunglobulin-Superfamilie.
• Dieser Rezeptor spielt eine entscheidende Rolle bei der Verknüpfung der humoralen und zellulären Immunität, indem er IgG mit hoher Affinität bindet und es Monozyten und Makrophagen ermöglicht, IgG-opsonisierte Ziele zu erkennen und zu beseitigen.
• CD64 vermittelt starke Effektorfunktionen, einschließlich der antikörperabhängigen zellulären Zytotoxizität (ADCC) gegen virusinfizierte Zellen, und trägt so zur antiviralen Immunantwort bei.
• Das Protein besteht aus drei extrazellulären immunglobulinähnlichen Domänen, einer einzelnen transmembranen Helix und einem kurzen zytoplasmatischen Schwanz. Das verwendete Immunogen entspricht dem extrazellulären Bereich (Aminosäuren 16–288) und deckt die IgG-bindenden Domänen ab.
• CD64 wird spezifisch auf der Oberfläche von Monozyten und Makrophagen exprimiert, was mit seiner Rolle bei der angeborenen Immunüberwachung und Antigenpräsentation übereinstimmt.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen N-verknüpfte Glykosylierung und Phosphorylierung. Der beobachtete Molekulargewichtsbereich (45–75 kDa) spiegelt die Heterogenität der Glykosylierung wider.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere Isoformen, von denen einige sezerniert werden oder als lösliche Rezeptoren fungieren können.
• Als Schlüsselrezeptor der angeborenen Immunität und Auslöser für ADCC ist CD64 ein validierter Biomarker für die Aktivierung von Monozyten/Makrophagen und ein therapeutisches Ziel in der Krebsimmuntherapie.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das die gesamte extrazelluläre Domäne (aa 16–288) abdeckt, was darauf hindeutet, dass dieser Antikörper wahrscheinlich sowohl die native Konformation als auch denaturierte Epitope erkennt. Für den Western Blot kann das beobachtete Bandmuster aufgrund variabler Glykosylierung als breites Band oder mehrere Bänder zwischen 45 und 75 kDa erscheinen; verwenden Sie eine geeignete Proteinbeladung und reduzierende Bedingungen.
• Für ELISA sollten Sie die Verwendung von rekombinantem FcγRI-Protein oder Zelllysaten aus menschlichen monozytären Zelllinien (z. B. THP-1) als Antigenquelle in Betracht ziehen. Validieren Sie die Assay-Spezifität mit Isotypkontrollen und durch Blockierung mit überschüssigem menschlichen IgG.
• Da die CD64-Expression auf Monozyten/Makrophagen beschränkt ist, stellen Sie sicher, dass Gewebe- oder Zellproben für diese Population angereichert sind, um robuste Signale zu erhalten. In gemischten Leukozytenpräparationen kann eine Co-Färbung mit CD14 helfen, die Monozyten-Identität zu bestätigen.
• Es wird erwartet, dass der Antikörper mit menschlichem CD64 kreuzreagiert, aber nicht mit anderen Fcγ-Rezeptoren (CD32, CD16). Wenn eine breitere Reaktivität erforderlich ist, testen Sie gegen rekombinante Proteine verschiedener Mitglieder der FcγR-Familie.
• Aufgrund seiner Rolle bei der ADCC kann dieser Antikörper in funktionellen Assays nützlich sein, die die monozytenvermittelte Abtötung überwachen; jedoch sollten seine blockierenden oder aktivierenden Eigenschaften experimentell bestimmt werden.

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