Anti-CD45 Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für FC, ELISA - P08575

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD45

• CD45, auch bekannt als Leukozyten-Common-Antigen (L-CA) oder T200, ist eine Rezeptor-Tyrosin-Protein-Phosphatase (PTPRC), die eine entscheidende Rolle bei der Immunzellsignalgebung spielt.
• Es fungiert als positiver Regulator der T-Zell-Koaktivierung nach Bindung an DPP4. Die erste PTPase-Domäne weist enzymatische Aktivität auf, während die zweite die Substratspezifität der ersten zu beeinflussen scheint. Nach T-Zell-Aktivierung rekrutiert und dephosphoryliert es SKAP1 und FYN. Es dephosphoryliert LYN und moduliert dadurch die LYN-Aktivität. Verwandte Referenzen: PMID:35767951
• CD45 interagiert mit CLEC10A an der Grenzfläche zwischen antigenpräsentierender Zelle und T-Zelle, was zur Modulation der T-Zell-Aktivierungsschwellen und zur Verhinderung von Autoreaktivität beiträgt.
• Durch alternatives Spleißen entstehende Isoforme (von Isoform 1 bis 8) werden unterschiedlich in Thymozyten exprimiert, wobei die Isoformen 1, 2, 3, 5 und 7 nachgewiesen werden und andere nicht. Die unterschiedlichen Proteinmassen (131–147 kDa) spiegeln diese Isoformvielfalt wider.
• Subzellulär lokalisiert sich CD45 an der Zellmembran, in Membran-Rafts und der immunologischen Synapse, was mit seiner Rolle bei der proximalen T-Zell-Rezeptor-Signalgebung übereinstimmt.
• Als Wirtsfaktor fungiert CD45 als Rezeptor für das humane Cytomegalovirus-Protein UL11, das die virale Bindung an T-Zellen vermittelt und anschließend die Proliferation und Signalgebung von T-Zellen beeinträchtigt.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen schwere Glykosylierung, Phosphorylierung sowie das Vorhandensein eines Signalpeptids, einer Transmembranhelix und tandemartig angeordneter Phosphatase-Domänen.
• CD45 wird breit auf allen kernhaltigen hämatopoetischen Zellen exprimiert und ist essenziell für die Entwicklung und Aktivierung von Lymphozyten, wodurch es zu einem wichtigen diagnostischen Marker für die Identifizierung von Leukozyten wird.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das verwendete Immunogen (Aminosäuren 26–577) deckt die extrazelluläre Region von humanem CD45 ab, einschließlich mehrerer isoformspezifischer Domänen; diese breite Region lässt vermuten, dass der Antikörper verschiedene CD45-Isoformen in nativer Konformation erkennen kann.
• Für die Durchflusszytometrie (FC) sollten Sie den Antikörper auf relevanten menschlichen Leukozytensubpopulationen (z. B. PBMCs, Jurkat-Zellen) titrieren, um die optimale Färbekonzentration zu bestimmen; verwenden Sie Isotypkontrollen, um unspezifische Bindung zu bewerten.
• Für ELISA-Anwendungen bewerten Sie direkte oder Capture-Formate mit rekombinantem CD45-Protein oder Zelllysaten; bestätigen Sie Linearität und Sensitivität mit Standardkurven.
• Da CD45 stark glykosyliert ist, stellen Sie sicher, dass die Antikörperbindung durch Glykosylierung in bestimmten Probenarten nicht behindert wird; denaturierende Bedingungen können die Epitopzugänglichkeit beeinträchtigen.
• Der Antikörper wird auf Eis geliefert; aliquotieren Sie ihn und lagern Sie ihn bei den empfohlenen Temperaturen (z. B. -20°C), um die Stabilität zu erhalten und wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden.

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