Anti-CD45 monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, mIHC, ELISA - P08575

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD45

• CD45, offiziell als Rezeptor-Tyrosin-Protein-Phosphatase C (PTPRC) bezeichnet, ist auch bekannt als Leukozyten-Common-Antigen (L-CA), T200 und B220 (im Kontext seiner Isoform-spezifischen Expression). Es ist ein wichtiges transmembranes Glykoprotein, das auf allen kernhaltigen hämatopoetischen Zellen exprimiert wird.
• Diese Phosphatase ist essenziell für die T-Zell-Aktivierung und wirkt als positiver Regulator der T-Zell-Koaktivierung nach Bindung an DPP4. Ihre erste Phosphatase-Domäne besitzt enzymatische Aktivität, während die zweite die Substratspezifität moduliert. Nach T-Zell-Aktivierung rekrutiert CD45 Signal moleküle wie SKAP1, FYN und LYN und dephosphoryliert sie. Verwandte Referenzen: PMID:35767951
• Im Kontext mikrobieller Infektionen fungiert CD45 als Rezeptor für das humane Cytomegalievirus-Protein UL11 und vermittelt die Bindung von UL11 an T-Zellen. Diese Interaktion führt zu einer reduzierten Tyrosinphosphorylierung von Signalproteinen nach TCR-Stimulation und einer beeinträchtigten T-Zellproliferation.
• Subzellulär lokalisiert sich CD45 an der Zellmembran, mit einer Anreicherung in Membran-Rafts und an der immunologischen Synapse, was seine Rolle bei proximalen Signalisierungsvorgängen unterstreicht.
• Das Gen PTPRC unterliegt einem umfangreichen alternativen Spleißen, wodurch multiple Isoformen (z. B. Isoformen 1–8) entstehen, die unterschiedliche gewebespezifische Expressionsmuster aufweisen, insbesondere bei Thymozyten.
• Posttranslationelle Modifikationen umfassen N-Glykosylierung und Phosphorylierung. Mutationen in PTPRC sind mit schwerer kombinierter Immunschwäche (SCID) verbunden.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Berücksichtigen Sie für den Western Blot das große Molekulargewicht (~147 kDa), indem Sie ein geeignetes SDS-PAGE-Gel mit niedrigem Prozentanteil und verlängerte Transferbedingungen verwenden. Fügen Sie einen Positivkontroll-Lysat aus einer humanen Leukozyten-Zelllinie (z. B. Jurkat) hinzu, um die Spezifität der Bande zu bestätigen.
• Optimieren Sie bei IHC-P und mIHC die Antigen-Retrieval (z. B. hitzeinduzierte Epitop-Retrieval) und titrieren Sie die Antikörperkonzentration, da die Reaktivität humanspezifisch ist. Gegenfärben Sie mit einem Kernfarbstoff, um die Zellmorphologie sichtbar zu machen.
• Für den ELISA kann dieser monoklonale Antikörper als Nachweisreagenz dienen; erwägen Sie bei der Entwicklung eines Sandwich-Assays die Paarung mit einem Fangantikörper, der ein nicht überlappendes CD45-Epitop erkennt.

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