Anti-CD44 (KO-validiert) Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, FC, ELISA - P16070

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD44-Funktion und Lokalisierung

• CD44 ist ein Single-Pass Typ I Membranprotein, das als primärer Rezeptor für Hyaluronan (HA) dient und auch mit Kollagen, Wachstumsfaktoren, Zytokinen und Proteasen interagiert, wodurch Zellen Veränderungen in der Gewebeumgebung wahrnehmen und darauf reagieren können. Verwandte Referenzen: PMID:16541107, PMID:19703720, PMID:22726066, PMID:18757307, PMID:23589287
• CD44 vermittelt Lymphozytenaktivierung, Homing und Rezirkulation sowie Hämatopoese und Entzündungsreaktionen auf bakterielle Infektionen. Verwandte Referenzen: PMID:7528188
• Die CD44-intrazelluläre Signalübertragung umfasst den Aufbau von Proteinkomplexen mit Rezeptorkinasen und Membranproteasen, was zur Aktivierung von PKN2, RAC1, RHOA und Phospholipase C führt, die die Reorganisation des Zytoskeletts und die Calcium-Mobilisierung fördern. Verwandte Referenzen: PMID:18757307, PMID:23589287, PMID:15123640
• Das Protein lokalisiert hauptsächlich an der Plasmamembran und an Mikrovilli, aber eine lösliche Ektodomäne kann in den extrazellulären Raum abgespalten werden.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen; die epitheliale Isoform 10 (CD44v) ist in Karzinomen hoch exprimiert, während Neuroblastomzellen ihre Expression unterdrücken.
• Auf Proteinebene wird CD44 in Fibroblasten, Urin und Plazenta nachgewiesen. Verwandte Referenzen: PMID:25326458, PMID:36213313, PMID:37453717, PMID:32337544
• Das Protein wird stark durch Glykosylierung, Phosphorylierung und Proteoglykan-Zugabe modifiziert und weist Disulfidbrücken auf; es ist auch an der Internalisierung des Maul- und Klauenseuche-Virus beteiligt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die N-terminale Hyaluronan-Bindungsdomäne (aa 20–178), die konserviert und oberflächenexponiert ist; dieser Antikörper kann daher in Anwendungen wie WB und IF/ICC mehrere CD44-Isoformen und native Konformationen nachweisen.
• Für Western Blotting ist das vorhergesagte Molekulargewicht ~82 kDa, aber umfangreiche Glykosylierung kann ein diffuses oder leiterartiges Bandenmuster verursachen; ziehen Sie eine Vorbehandlung mit PNGase F oder anderen Deglykosylasen in Betracht, um die Spezifität zu bestätigen.
• Bei der Immunhistochemie und Immunfluoreszenz validieren Sie die Spezifität unter Verwendung von CD44-Knockdown- oder Knockout-Kontrollzelllinien/-geweben, um die Färbemuster zu bestätigen.
• Für die Durchflusszytometrie optimieren Sie die Antikörpertitration und schließen Isotypenkontrollen ein, um die CD44-Expression auf Lymphozyten-Subsets, Karzinomzellen oder anderen relevanten Populationen genau zu quantifizieren.
• Angesichts der Abschaltung der CD44-Ektodomäne sollte die Probenvorbereitung für ELISA-basierte Assays berücksichtigen, ob gesamtes lösliches CD44 oder spezifische Isoformen nachgewiesen werden sollen; schließen Sie geeignete Standards und Blockierschritte ein.

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