Anti-CD4-Kaninchen-polykolonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IF-P, ELISA – P01730

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: CD4-Funktion und -Lokalisation

• CD4 ist ein 51 kDa großes integrales Membran-Glykoprotein, das auch als T-Zell-Oberflächenantigen T4/Leu-3 bekannt ist und zur Immunglobulin-Superfamilie gehört. Es enthält vier extrazelluläre, immunglobulinähnliche Domänen (D1–D4), eine einzelne Transmembranhelix und einen zytoplasmatischen Schwanz, der mit der Src-Kinase LCK interagiert.
• In T-Helferzellen fungiert CD4 als Korezeptor für MHC-Klasse-II-Moleküle. Es bindet gleichzeitig an den T-Zell-Rezeptor (TCR) und MHC-Klasse II auf antigenpräsentierenden Zellen und rekrutiert LCK, um Substrate des TCR-CD3-Komplexes zu phosphorylieren. Dadurch werden Signalkaskaden initiiert, die zur T-Zell-Aktivierung, Lymphokinproduktion und Proliferation führen.
• CD4 ist für die Entwicklung von Thymozyten und die Differenzierung von T-Helferzellen entscheidend. Es löst außerdem die Reifung von Monozyten zu Makrophagen aus und unterstreicht damit seine Rolle in der angeborenen und adaptiven Immunität.
• Neben T-Zellen wird CD4 in Makrophagen, dendritischen Zellen und NK-Zellen exprimiert, wo es über TCR/LCK-unabhängige Signalwege die Differenzierung, Zytokinexpression und Zellmigration moduliert.
• CD4 dient über seine D1-Domäne als primärer Rezeptor für das humane Immundefizienzvirus 1 (HIV-1) und erleichtert den viralen Eintritt. Es ist außerdem ein Rezeptor für das humane Herpesvirus 7 (HHV-7). Eine HIV-1-Infektion führt durch das virale Protein Vpu zur Herunterregulierung von CD4. Verwandte Referenzen: PMID:12089508, PMID:16331979, PMID:2214026, PMID:17346169, PMID:7909607
• Die subzelluläre Lokalisation befindet sich überwiegend an der Zellmembran, was mit seiner Funktion als Oberflächenrezeptor übereinstimmt. Eine lösliche Form kann bei der T-Zell-Aktivierung abgespalten werden.
• CD4 wird stark in T-Helferzellen exprimiert, kommt aber auch in anderen Immunzellen wie Makrophagen, dendritischen Zellen und NK-Zellen vor. Die CD4-Expression ist ein definierender Marker zur Identifizierung von T-Helferzellen.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören N-glykosylierung, Disulfidbindungen innerhalb der Immunglobulindomänen und Palmitoylierung am zytoplasmatischen Schwanz, wodurch möglicherweise die Lokalisation in Membranmikrodomänen und die Signalübertragung moduliert werden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die extrazelluläre Domäne (AS 26–200) des humanen CD4 und deckt die Bindungsstellen für MHC-Klasse II und HIV-1-gp120 ab. Dieses Design kann den Nachweis von vollständigem CD4 in denaturierenden Western-Blots sowie von nativen Konformationen in Immunfluoreszenz und ELISA ermöglichen.
• Beim Western-Blot ist unter reduzierenden Bedingungen eine Bande bei etwa 51 kDa zu erwarten. Glykosylierung kann dazu führen, dass das scheinbare Molekulargewicht höher erscheint (55–60 kDa). Verwenden Sie geeignete Positivkontrollen (z. B. Jurkat- oder humane PBMC-Lysate) und erwägen Sie die Verwendung eines Reduktionsmittels.
• Die berichtete Kreuzreaktivität mit CD4 von Maus und Ratte sollte in den jeweiligen experimentellen Modellen überprüft werden. Ein Sequenzvergleich zeigt eine Identität von etwa 70 % in der extrazellulären Region; eine Titration des Primärantikörpers und eine sorgfältige Validierung werden empfohlen.
• Der Antikörper kann in Formaten für indirekte Immunfluoreszenz (IF/ICC) und ELISA eingesetzt werden. Stellen Sie für IF geeignete Fixierungs- und Permeabilisierungsprotokolle sicher; bei der Färbung der Zelloberfläche ist eine Permeabilisierung zu vermeiden. Validieren Sie den Antikörper im relevanten Zelltyp oder Gewebe.
• Beachten Sie bei der Verwendung für funktionelle Studien (z. B. zur Blockierung der HIV-1-Bindung), dass die polykolonale Beschaffenheit zu variablen Ergebnissen führen kann; für eine konsistente, epitopspezifische Blockierung können monoklonale Formate vorzuziehen sein.

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