Anti-CD4 monoklonaler Antikörper für die Durchflusszytometrie - P01730

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD4-Funktion und -Lokalisierung

• CD4 ist ein transmembranes Glykoprotein und Mitglied der Immunglobulin-Superfamilie, bestehend aus einer extrazellulären Region mit vier Ig-ähnlichen Domänen (D1–D4), einer Einzelpass-Transmembranhelix und einem kurzen cytoplasmatischen Ende. Es wird hauptsächlich auf der Oberfläche von T-Helferzellen exprimiert, sowie auf Monozyten, Makrophagen, dendritischen Zellen und NK-Zellen.
• In T-Helferzellen fungiert CD4 als Korezeptor für MHC-Klasse-II-Moleküle. Es bindet an nicht-polymorphe Regionen von MHC-Klasse-II auf antigenpräsentierenden Zellen, stabilisiert die Interaktion zwischen dem T-Zell-Rezeptor (TCR) und Peptid-MHC-Komplexen, was für die Antigenerkennung und T-Zell-Aktivierung essentiell ist.
• Nach TCR-Bindung rekrutiert CD4 über sein cytoplasmatisches Ende die Src-Familienkinase LCK in die Nähe des TCR-CD3-Komplexes. LCK phosphoryliert immunrezeptortyrosinbasierte Aktivierungsmotive (ITAMs) auf CD3-Ketten, was intrazelluläre Signalkaskaden initiiert, die zu T-Zell-Proliferation, Zytokinproduktion und Differenzierung führen.
• Zusätzlich zu seiner Rolle in der adaptiven Immunität dient CD4 als primärer Rezeptor für das Humane Immundefizienz-Virus Typ 1 (HIV-1) über die Interaktion mit dem viralen Hüllglykoprotein gp120. Es dient auch als Rezeptor für das humane Herpesvirus 7 (HHV-7). Die HIV-1-Proteine Vpu und Nef regulieren die CD4-Oberflächenexpression herunter, um den viralen Austritt und die Immunevasion zu erleichtern. Verwandte Referenzen: PMID:12089508 PMID:16331979 PMID:2214026 PMID:17346169 PMID:7909607
• CD4 wird posttranslational durch N-verknüpfte Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung, Palmitoylierung an einem juxtamembranen Cystein und Phosphorylierung durch LCK modifiziert. Diese Modifikationen regulieren Proteinfaltung, Membranlokalisation und Signaltransduktion.
• Die Expression von CD4 ist ein definierendes Merkmal von Helfer-T-Zellen und wird häufig als immunphänotypischer Marker für die Identifizierung von T-Zell-Subsets verwendet. Seine Oberflächendichte kann mit dem Zellaktivierungs- und Differenzierungszustand variieren.
• In Makrophagen und NK-Zellen kann die CD4-Bindung über TCR/LCK-unabhängige Signalwege Differenzierung, Zytokinexpression und Zellmigration auslösen, was seine funktionelle Vielseitigkeit über die T-Zell-Signalgebung hinaus unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper ist direkt mit konjugiert, einem hellen und photostabilen Far-Red-Fluorophor, und ist einsatzbereit für die Durchflusszytometrie. Titrieren Sie den Antikörper, um die optimale Färbekonzentration für Ihren spezifischen Zelltyp und Ihre Versuchsbedingungen zu bestimmen (typischer Bereich: 0,1–1 µg pro 1×10^6 Zellen).
• Da die CD4-Oberflächenexpression auf ruhenden T-Helferzellen hoch ist, sollten geeignete Isotypkontrollen und eine Lebend-/Totzell-Diskriminierung eingeschlossen werden, um eine spezifische Färbung sicherzustellen. Für Mehrfarben-Panels kombinieren Sie mit Anti-CD3 und Anti-CD8, um T-Zell-Subsets gründlich zu analysieren.
• Der Antikörper kreuzreagiert mit sowohl humanem als auch Javaneraffen-CD4, was ihn für Studien mit nicht-menschlichen Primatenmodellen geeignet macht. Validieren Sie den Antikörper in Ihrer spezifischen Probenmatrix und Ihrem Fixierungs/Permeabilisierungsprotokoll, falls eine intrazelluläre Färbung erforderlich ist.
• Das Immunogen ist rekombinantes humanes CD4, wahrscheinlich entsprechend der extrazellulären Domäne. Daher erkennt der Antikörper möglicherweise bevorzugt natives, nicht denaturiertes CD4; Denaturierungsbedingungen (z. B. Western Blot unter reduzierenden Bedingungen) erfordern möglicherweise eine Validierung.
• Für Anwendungen jenseits der Durchflusszytometrie, wie Immunhistochemie oder Immunpräzipitation, werden aufgrund fehlender Herstellerdaten Optimierung und unabhängige Verifizierung empfohlen.

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