Anti-CD16b Kaninchen-Monoklonaler Antikörper für WB, FC, ELISA - O75015

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD16b

• CD16b (FcγRIIIB) ist ein Rezeptor niedriger Affinität für die Fc-Region von Immunglobulinen Gamma, kodiert vom FCGR3B-Gen. Es ist ein Glykosylphosphatidylinositol (GPI)-verankertes Glykoprotein ohne Transmembrandomäne, wodurch es sich von FcγRIIIA unterscheidet.
• Der Rezeptor bindet komplexes oder aggregiertes IgG sowie monomeres IgG, aber im Gegensatz zu FcγRIIIA vermittelt er keine antikörperabhängige zellvermittelte Zytotoxizität (ADCC) oder Phagozytose. Er fungiert wahrscheinlich als Köderrezeptor, der Immunkomplexe in der peripheren Zirkulation einfängt, ohne Neutrophile zu aktivieren.
• CD16b wird spezifisch von polymorphkernigen Leukozyten (Neutrophilen) und stimulierten Eosinophilen exprimiert, was seine Rolle bei der angeborenen Immunüberwachung auf Granulozyten unterstreicht.
• Subzellulär befindet sich CD16b auf der Zellmembran und kann durch Spaltung seines GPI-Ankers als sezernierte Form freigesetzt werden.
• Das Protein enthält zwei immunglobulinähnliche Domänen und ist stark glykosyliert; ein vorhergesagtes Molekulargewicht von etwa 26 kDa (Kernprotein 26.243 Da) wird aufgrund der Glykosylierung oft als diffuse Bande beobachtet.
• Wichtige strukturelle Merkmale sind ein N-terminales Signalpeptid (AA 1-18), die extrazelluläre IgG-bindende Domäne (AA 20-208, verwendet als Immunogen) und eine C-terminale GPI-Ankerbindungsstelle. Mehrere Aliase (CD16, FCG3, FCGR3, FCR-10, FCRIII) spiegeln die historische Nomenklatur wider.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen deckt die gesamte extrazelluläre IgG-bindende Domäne (AA 20-208) von humanem CD16b ab, wodurch es gut geeignet ist, natives und denaturiertes Protein in verschiedenen Anwendungen nachzuweisen.
• Für Western Blot (WB) ist unter reduzierenden Bedingungen eine Bande um 26 kDa zu erwarten; aufgrund der Glykosylierung kann es zu Verschmierungen oder einer diffusen Bande kommen – validieren Sie mit geeigneten Positivkontrollen (z. B. Neutrophilenlysate) und erwägen Sie eine Deglykosylierung, falls eine scharfe Bande erforderlich ist.
• Bei der Durchflusszytometrie (FC) verwenden Sie einen kompatiblen Fluorophor-konjugierten Sekundärantikörper zum Nachweis von oberflächenständigem CD16b auf lebenden, unfixierten Neutrophilen; vermeiden Sie Fixierungsmethoden, die die Integrität von GPI-verankerten Proteinen verändern können.
• Für ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; für Sandwich-Formate wird die Paarung mit einem nicht konkurrierenden Anti-CD16b-Klon empfohlen, und die Assay-Bedingungen sollten mit rekombinantem oder gereinigtem CD16b-Protein optimiert werden.
• Kreuzreaktivität ist auf Menschen beschränkt; es ist keine Reaktivität mit Maus- oder Ratten-CD16b zu erwarten, wählen Sie daher ein passendes Modellsystem oder validieren Sie mit humanen Proben.

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