Biotinylierter monoklonaler Anti-CD16-Antikörper für FC – P08637 / O75015

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CD16

• CD16 ist der Rezeptor III-A für die γ-Fc-Region von Immunglobulin G mit niedriger Affinität (FCGR3A), auch als CD16a, Fc-gamma RIII-alpha und FcRIIIa bezeichnet.
• Er fungiert als Rezeptor für das Fc-Fragment von IgG und wird optimal durch aggregierte Antigen-IgG-Komplexe auf Zelloberflächen aktiviert, um eine antikörperabhängige zelluläre Zytotoxizität (ADCC) zu vermitteln, ohne freies monomeres IgG zu binden. Zugehörige Referenzen: PMID:11711607 PMID:21768335 PMID:22023369
• In NK-Zellen umfasst die durch CD16 vermittelte Signalübertragung die Phosphorylierung von ITAM-haltigen Adapterproteinen, die Aktivierung von PI3K und einen anhaltenden Anstieg der intrazellulären Calciumkonzentration, was schließlich zur Freisetzung proinflammatorischer Zytokine und zur Degranulation führt. Zugehörige Referenzen: PMID:1825220 PMID:23024279 PMID:2532305
• CD16 spielt eine zentrale Rolle für das Überleben und die Proliferation von NK-Zellen sowie für die Entstehung von adaptiven NK-Zellen mit Gedächtnis-ähnlichen Eigenschaften, die eine gesteigerte IFN-γ-Produktion und antivirale ADCC-Kapazität aufweisen. Zugehörige Referenzen: PMID:24412922 PMID:25786175 PMID:29967280 PMID:9916693
• Der Rezeptor trägt außerdem zur Antitumorwirksamkeit therapeutischer monoklonaler Antikörper bei, indem er die ADCC von mit IgG opsonierten Tumorzellen vermittelt; bei afucosylierten IgG1-Antikörpern wurde eine gesteigerte Aktivität beobachtet. Zugehörige Referenzen: PMID:27670158 PMID:34485821 PMID:28566370
• CD16 wird hauptsächlich auf der Oberfläche von NK-Zellen und einer Untergruppe zirkulierender Monozyten exprimiert und kann auch in einer sezernierten Form vorkommen. Zugehörige Referenzen: PMID:2526846 PMID:27670158
• Darüber hinaus ist CD16 über die antikörperabhängige Verstärkung an der Pathogenese des Dengue-Virus beteiligt, wobei afucyosylierte Anti-Dengue-IgG1-Antikörper den Viruseintritt in myeloische Zellen erleichtern.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören N-Glykosylierung, Disulfidbrückenbildung und Phosphorylierung, die die Rezeptorfunktion und Signalübertragung regulieren.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht der extrazellulären Domäne (Aminosäuren 20–208) des humanen CD16, was darauf hindeutet, dass der Antikörper ein Epitop in dieser Region erkennt; falls erforderlich, sollte die Reaktivität mit beiden Isoformen FCGR3A (P08637) und FCGR3B (O75015) überprüft werden.
• Für die Durchflusszytometrie sollte die Biotin-Markierung zusammen mit fluorophorkonjugierten Streptavidin-Sekundärreagenzien verwendet werden; titrieren Sie sowohl den Primärantikörper als auch das Streptavidin-Konjugat, um optimale Signal-Rausch-Verhältnisse zu bestimmen.
• Geeignete Isotypkontrollen und Fc-Blockierungsschritte sollten eingesetzt werden, um die unspezifische Bindung zu minimieren, insbesondere bei der Analyse von Fc-Rezeptor-exprimierenden Zellen wie NK-Zellen und Monozyten.
• Validieren Sie den Antikörper im relevanten Probensystem, beispielsweise in mononukleären Zellen des peripheren Blutes, und berücksichtigen Sie Fixierungs-/Permeabilisierungsprotokolle sorgfältig, da diese die Zugänglichkeit des Epitops beeinflussen können.

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