Anti-CD14-Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB – P10810

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von CD14

• Das Monozyten-Differenzierungsantigen CD14 (CD14), auch als myeloidzellspezifisches leucinreiches Glykoprotein bekannt, ist ein durch Glykosylphosphatidylinositol (GPI) verankertes Membran-Glykoprotein, das zur Familie der leucinreichen Wiederholungen (LRR) gehört.
• CD14 fungiert zusammen mit dem LPS-bindenden Protein (LBP) als Korezeptor für bakterielles Lipopolysaccharid (LPS) und transportiert LPS zum LY96/TLR4-Komplex, um angeborene Immunantworten einzuleiten (PubMed:16148141).
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:16148141
• Die nachgeschaltete Signalübertragung über MyD88, TIRAP und TRAF6 führt zur Aktivierung von NF-kappa-B, zur Zytokinsekretion und zur Entzündungsreaktion (PubMed:15895089, PubMed:8612135).
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:15895089, PMID:8612135
• CD14 dient als Korezeptor für TLR2:TLR6- und TLR2:TLR1-Heterodimere als Reaktion auf diacylierte bzw. triacylierte Lipopeptide; diese Komplexe lösen eine Signalübertragung von der Zelloberfläche aus und werden abhängig von Lipid-Rafts zum Golgi-Apparat transportiert.
• Als akzessorischer Rezeptor bindet CD14 die Lipoproteine LprA, LprG und LpqH von M. tuberculosis zusammen mit TLR2 und TLR1 und moduliert dadurch die Funktionen antigenpräsentierender Zellen (PubMed:19362712).
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:19362712
• CD14 bindet außerdem elektronegatives LDL (LDL(-)) und vermittelt die durch LDL(-) induzierte Zytokinfreisetzung.
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst die Zellmembran, Membran-Rafts und den Golgi-Apparat; außerdem kann CD14 in löslicher Form sezerniert werden.
• Auf Proteinebene wurde CD14 in Peritonealmakrophagen, alveolären Lungenmakrophagen, dendritischen Makrophagen und Lungenmakrophagen nachgewiesen (PubMed:8612135, PubMed:19362712).
  Zugehörige Referenzen:
  PMID:8612135, PMID:19362712

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht der extrazellulären Domäne (Aminosäuren 18–345) von Maus-CD14, die die leucinreiche Wiederholungsregion umfasst; dieses Design kann für den Nachweis sowohl membrangebundener als auch löslicher CD14-Formen geeignet sein.
• Für den Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von CD14 etwa 39 kDa; aufgrund der Glykosylierung kann die beobachtete Bande jedoch etwas höher laufen. Verwenden Sie einen geeigneten Blockierungs- und Lysepuffer, um die Epitope zu erhalten.
• Die Durchflusszytometrie kann zur Analyse der CD14-Zelloberflächenexpression auf Makrophagen und Monozyten eingesetzt werden; stellen Sie für Mausproben ein geeignetes Gating und entsprechende Isotypkontrollen sicher.
• ELISA kann zum Nachweis von löslichem CD14 oder zur Untersuchung von LPS-Bindungsinteraktionen geeignet sein; optimieren Sie die Beschichtungsbedingungen und Detektionsantikörper für das jeweilige Assayformat.
• Validieren Sie den Antikörper im relevanten Probensystem, beispielsweise in murinen Peritonealmakrophagen oder Lungenmakrophagenpopulationen, um Reaktivität und Spezifität zu bestätigen.

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