Anti-CD117/c-Kit Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, FC, ELISA - P05532

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CD117/c-Kit Funktion und Lokalisierung

• CD117/c-Kit ist ein Single-Pass Transmembran-Tyrosin-Protein-Kinase-Rezeptor, der spezifisch an Stammzellfaktor (KITLG/SCF) bindet.
• Er spielt eine übergeordnete regulatorische Rolle bei der Hämatopoese, der Stammzellerhaltung, der Gametogenese, der Mastzellentwicklung und der Melanogenese.
• Nach Ligandenbindung aktiviert KIT mehrere intrazelluläre Kaskaden, einschließlich der PI3K/AKT-, RAS/MAPK- und JAK/STAT-Signalwege, die das Zellüberleben, die Proliferation und die Differenzierung steuern.
• Der Rezeptor ist hauptsächlich in der Zellmembran lokalisiert, aber aktiviertes KIT wird schnell in das Zytoplasma internalisiert, um die Signalübertragung abzuschwächen oder den Rezeptor abzubauen.
• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere Isoformen; Isoform 3 wird vorwiegend in hämatopoetischen Stammzellen und postmeiotischen Keimzellen exprimiert, während die Isoformen 1 und 2 in früheren Stadien der Spermatogenese und im Knochenmark vorkommen.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen ligand-induzierte Phosphorylierung, N-verknüpfte Glykosylierung und Ubiquitinierung, die die Signalausgabe und den Rezeptorumsatz feinabstimmen.
• Klassifiziert als Proto-Onkogen sind Gain-of-Function-Mutationen in KIT mit gastrointestinalen Stromatumoren, Mastozytose und anderen Malignomen in Verbindung gebracht worden.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting ist ein Hauptband bei etwa 109 kDa zu erwarten, das dem Vollrezeptor entspricht; je nach Zelltyp und Lysebedingungen kann auch ein prozessiertes Fragment von ~22 kDa nachgewiesen werden.
• Da das Immunogen einen großen Teil der extrazellulären Domäne abdeckt, eignet sich dieser Antikörper gut für den Nachweis von Oberflächen-CD117 mittels Durchflusszytometrie an lebenden, nicht permeabilisierten Mauszellen.
• Die ELISA-Leistung sollte mit einem geeigneten Capture-Format optimiert werden; erwägen Sie die Paarung mit einem Detektionsantikörper, der an eine andere Epitopbindungsstelle bindet, um Wettbewerb zu vermeiden.
• Validieren Sie die Antikörperspezifität unter Verwendung einer bekannten Positivkontrolle (z.B. Maus-Knochenmarkszellen, Mastzelllinien) und einer Negativkontrolle, bei der die CD117-Expression fehlt oder herunterreguliert ist.

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