Anti-CCT4 polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P50991

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: CCT4-Funktion und -Lokalisierung

• CCT4 kodiert für die Delta-Untereinheit des T-Komplex-Protein-1 (TCP-1)-Ringkomplexes (TRiC), eines cytosolischen Chaperonins, das die ATP-abhängige Faltung von ~10 % des Proteoms vermittelt, insbesondere von Aktin und Tubulin. Verwandte Referenzen: PMID:25467444, PMID:36493755, PMID:35449234
• TRiC faltet auch das Telomerase-Cajal-Körper-Protein 1 (WRAP53/TCAB1), was die CCT4-Funktion mit der Telomererhaltung verbindet. Verwandte Referenzen: PMID:25467444
• Das Chaperonin trägt zur Ziliogenese bei, indem es den Zusammenbau des BBSome unterstützt, eines für den Vesikeltransport zu Zilien kritischen Komplexes. Verwandte Referenzen: PMID:20080638
• CCT4 lokalisiert hauptsächlich im Zytoplasma und ist an Zentrosomen und den Basalkörpern von Zilien angereichert, was mit seiner Rolle bei der Faltung von Zytoskelettproteinen und dem ziliären Transport übereinstimmt.
• Das Protein unterliegt mehreren posttranslationalen Modifikationen, einschließlich Acetylierung, Methylierung und Phosphorylierung, die die Chaperonin-Aktivität regulieren können.
• Alternatives Spleißen führt zu mehreren Transkriptvarianten, was auf eine funktionelle Diversifizierung hindeutet.
• Als Untereinheit von TRiC ist CCT4 Teil eines großen hetero-oligomeren Komplexes, der aus acht verschiedenen Untereinheiten besteht, die in einer Doppelringstruktur angeordnet sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 130-390 von humanem CCT4; die Bindung an Epitope innerhalb dieser Region wird als spezifisch erwartet, jedoch sollte aufgrund von Sequenzhomologien innerhalb der Familie eine Kreuzreaktivität mit anderen TCP-1-Untereinheiten ausgeschlossen werden.
• Für Western Blot wird eine Startverdünnung von 1:1000 für Lysate von Mensch, Maus und Ratte empfohlen; ein Band nahe 58 kDa ist zu erwarten. Relevante positive und negative Kontrollen einbeziehen.
• Bei der Immunfluoreszenz zeigt CCT4 eine cytoplasmatische Färbung mit Anreicherung an Zentrosomen und ziliären Basalkörpern; eine Vorbehandlung mit Detergens kann das Mikrotubuli- und Basalkörper-Signal verstärken.
• Für ELISA-Anwendungen das rekombinante Protein oder Zelllysate als Beschichtungsantigen verwenden; die chargenabhängige Variabilität, die polyklonalen Antikörpern inhärent ist, sollte für die quantitative Konsistenz bewertet werden.
• Angesichts der Reaktivität des Antikörpers bei Mensch, Maus und Ratte ist er für translationale Studien in diesen Spezies geeignet.

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