Polyklonaler Anti-Cathepsin-K-(CTSK)-Antikörper für WB und ELISA – P43235

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Cathepsin K

• Cathepsin K (CTSK), auch als Cathepsin O, O2 oder X bekannt, ist eine lysosomale Cysteinprotease der Papain-Familie, die als inaktives Zymogen synthetisiert und durch proteolytische Aktivierung aktiviert wird.
• Es spielt eine entscheidende Rolle beim osteoklastischen Knochenabbau, indem es Proteine der Knochenmatrix, einschließlich Kollagen Typ I, abbaut, und ist für einen normalen Knochenumbau unerlässlich.
• CTSK weist bei saurem pH-Wert eine starke Endoproteaseaktivität gegenüber Fibrinogen auf, was auf eine Rolle beim Abbau der extrazellulären Matrix über den Knochen hinaus hindeutet.
• In der Schilddrüse ist CTSK an der Freisetzung des Schilddrüsenhormons Thyroxin (T4) durch begrenzte Proteolyse von Thyreoglobulin im Lumen der Schilddrüsenfollikel beteiligt (PubMed:11082042). Zugehörige Referenzen: PMID:11082042
• Das Protein wird überwiegend in Osteoklasten (PubMed:7805878) und epithelialen Schilddrüsenzellen (PubMed:11082042) exprimiert. Zugehörige Referenzen: PMID:7805878, PMID:11082042
• Auf subzellulärer Ebene befindet sich CTSK in Lysosomen, wird in den extrazellulären Raum sezerniert und kann sich in polarisierten Zellen an die apikale Zellmembran anlagern.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Glykosylierung und Disulfidbrückenbildung, die für Stabilität und Aktivität wichtig sind; das reife Enzym ist ein Glykoprotein.
• Mutationen in CTSK stehen mit der Pyknodysostose in Verbindung, einer autosomal-rezessiven Skelettdysplasie, die durch dichte Knochen (Osteosklerose) gekennzeichnet ist.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Da das Immunogen gegen ein rekombinantes Fragment (AS 115–329) erzeugt wurde, das die reife katalytische Domäne umfasst, ist zu erwarten, dass der Antikörper sowohl die Proform als auch das aktive reife CTSK unter denaturierenden Bedingungen im Western Blot (WB) erkennt. Der Nachweis des endogenen Proteins kann jedoch je nach Gewebeexpressionsniveau eine Optimierung erfordern.
• Für die Western-Blot-Analyse sollten reduzierende Bedingungen in Betracht gezogen und während der Probenvorbereitung Proteaseinhibitoren zugesetzt werden, um einen Abbau von CTSK zu verhindern. Das vorhergesagte Molekulargewicht des Proenzyms beträgt etwa 37 kDa, während reife, gespaltene Formen kleiner erscheinen können.
• Die berichtete Kreuzreaktivität mit der Maus deutet auf eine Eignung für translationale Studien mit Mausmodellen des Knochenstoffwechsels hin. Validieren Sie die Kreuzreaktivität in Ihrem spezifischen experimentellen System.
• Für ELISA sollte in Betracht gezogen werden, diesen Antikörper mit einem Fangantikörper zu kombinieren oder ihn direkt zur Detektion zu konjugieren. Da es sich um einen polyklonalen Antikörper handelt, sollte die Chargenkonsistenz überprüft werden.
• Saure Pufferbedingungen können die Antikörper-Antigen-Interaktion bei Anwendungen wie Immunhistochemie oder Enzymaktivitätsassays verbessern, da CTSK ein saures pH-Optimum besitzt.

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