Anti-Caspase-9 polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P55211

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Caspase-9-Funktion und Lokalisierung

• Caspase-9, auch bekannt als apoptotische Protease Mch-6 (MCH6), APAF-3 oder ICE-LAP6, ist ein Mitglied der Cystein-Asparaginsäure-Protease (Caspase)-Familie und wird beim Menschen durch das CASP9-Gen kodiert.
• Sie fungiert als Initiator-Caspase im intrinsischen Apoptoseweg. Nach der Freisetzung von Cytochrom c und der Bildung des Apaf-1-Apoptosoms wird Caspase-9 rekrutiert und aktiviert, wodurch sie anschließend Effektor-Caspasen-3 und -7 spaltet und aktiviert. Sie spaltet auch Poly(ADP-Ribose)-Polymerase (PARP) und fördert DNA-Schaden-induzierte Apoptose auf ABL1-abhängige Weise. Darüber hinaus spaltet Caspase-9 BIRC6 proteolytisch nach DIABLO/SMAC-vermittelter Hemmung des BIRC6-Caspase-Komplexes. Verwandte Referenzen: PMID:36758105 PMID:36758106
• Alternatives Spleißen von CASP9 produziert eine katalytisch inaktive Isoform, die als dominant-negativer Inhibitor der Caspase-9-Signalübertragung wirkt.
• Caspase-9 wird ubiquitär exprimiert, mit den höchsten Spiegeln im Herzen, wo sie spezifisch in Myozyten vorkommt. Mäßige Expression wird in Leber, Skelettmuskel und Bauchspeicheldrüse beobachtet.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung und Ubiquitin-ähnliche Konjugation, wie durch Proteomik-Daten angezeigt, die ihre Aktivität, Stabilität und Interaktion mit anderen Proteinen regulieren.
• Das Protein wird als inaktives Zymogen synthetisiert, das zur Aktivierung einer proteolytischen Prozessierung bedarf. Als Thiolprotease verwendet es einen katalytischen Cysteinrest für die Hydrolyse und wird unter Apoptose-bezogenen Hydrolasen klassifiziert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das für diesen Antikörper verwendete Immunogen entspricht den Aminosäuren 139–416 der humanen Caspase-9 (NP_001220.2). Diese Region umfasst einen Teil der großen katalytischen Domäne und erkennt möglicherweise sowohl die Voll- als auch die gespaltenen Formen. Für den Western Blot kann ein Band bei etwa 46 kDa für die Proform detektiert werden, mit zusätzlichen Bändern, die gespaltenen Fragmenten entsprechen, abhängig von der Probenbehandlung.
• Der Antikörper wird für Western Blot (WB), Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC), Immunhistochemie (IHC-P) und ELISA empfohlen. Forscher sollten Verdünnungen optimieren und geeignete positive und negative Kontrollen einschließen, insbesondere bei der Arbeit mit humanen, Maus- und Rattenproben.
• Da Caspase-9 hauptsächlich ein zytoplasmatisches Protein ist, das während der Apoptose zu Mitochondrien transloziert, kann die subzelluläre Lokalisierung variieren, und die Fixierungs-/Permeabilisierungsbedingungen für IF/ICC oder IHC-P sollten entsprechend angepasst werden.

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