Anti-Cas9 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q99ZW2

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Cas9-Funktion und -Lokalisierung

• Cas9 (CRISPR-assoziierte Endonuklease Cas9/Csn1) ist eine RNA-gesteuerte DNA-Endonuklease, die als Effektorprotein des adaptiven Immunsystems vom Typ II CRISPR-Cas in Streptococcus pyogenes dient.
  Verwandte Referenzen: PMID:21455174
• Im CRISPR-Interferenzweg bildet Cas9 einen Komplex mit einer CRISPR-RNA (crRNA) und einer trans-aktivierenden crRNA (tracrRNA). Dieser von doppelten RNA gesteuerte Komplex erkennt und spaltet doppelsträngige DNA-Ziele, die komplementär zur crRNA-Spacer-Sequenz sind.
• Die Zielerkennung und -spaltung erfordern eine kurze Protospacer-Adjacent-Mot ( PAM)-Sequenz (5’-NGG-3’ für SpCas9) unmittelbar stromabwärts der Zielstelle. Die PAM-Erkennung ist für die katalytische Aktivität unerlässlich und hilft, eigene DNA von fremder DNA zu unterscheiden.
  Verwandte Referenzen: PMID:24476820
• Neben der DNA-Spaltung beteiligt sich Cas9 auch an der Reifung von crRNAs. Zusammen mit tracrRNA und der Wirtsribonuklease III stabilisiert es das prä-crRNA:tracrRNA-Duplex für die korrekte Verarbeitung, wobei Cas9 selbst keine katalytische Rolle beim RNA-Schnitt hat.
  Verwandte Referenzen: PMID:24270795
• Cas9 ist ein Multidomänenprotein mit DNA-Bindungs-, Endonuklease- und Exonukleaseaktivitäten. Es ist für seine nukleolytischen Funktionen von zweiwertigen Metallionen wie Magnesium oder Mangan abhängig.
• Strukturell hochauflösend charakterisiert, zeigt Cas9 eine konformationelle Flexibilität, die seine Rollen bei der RNA-Bindung, der DNA-Entwindung und der koordinierten Spaltung durch seine zwei Nukleasedomänen (RuvC und HNH) ermöglicht.
• Das native Molekulargewicht von Cas9 beträgt etwa 158 kDa, was mit seiner großen Multidomänenarchitektur übereinstimmt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 450–730 von Streptococcus pyogenes Cas9, einen Bereich, der Teile der RuvC-Nukleasedomäne enthält. Berücksichtigen Sie, dass der Antikörper sowohl natives als auch denaturiertes Cas9-Protein erkennen kann.
• Für Western Blots beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von vollständigem Cas9 ~158 kDa; validieren Sie die Reaktivität im relevanten Probensystem (z. B. S. pyogenes-Lysate oder gentechnisch veränderte Zelllinien, die SpCas9 exprimieren).
• Bei der Entwicklung eines ELISA bewerten Sie die Leistung des Antikörpers gegen rekombinantes Cas9-Protein oder Zellextrakte. Die angegebene Kreuzreaktivität (Mensch, Andere) deutet auf Potenzial für Anwendungen hin, die humane Zelllinien oder Gewebe beinhalten, die exogenes Cas9 exprimieren.