Anti-Calreticulin monoklonaler Antikörper [KO validiert] für WB, IHC-P, IF/ICC, ELISA - P27797

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Calreticulin

• Calreticulin (CALR) ist ein 417 Aminosäuren langes calciumbindendes Protein, auch bekannt als CRP55, Calregulin, ERp60, HACBP und grp60, das beim Menschen vom CALR-Gen kodiert wird.
• Es fungiert als Lektin-Chaperon im Endoplasmatischen Retikulum (ER) und interagiert transient mit monoglucosylierten Glykoproteinen, um die Faltung, oligomere Assembly und Qualitätskontrolle über den Calreticulin/Calnexin-Zyklus zu fördern (PubMed:7876246). Verwandte Referenzen: PMID:7876246
• Calreticulin vermittelt auch den nuklearen Export von NR3C1 (Glukokortikoidrezeptor) durch Bindung an dessen DNA-Bindedomäne und beeinflusst so die transkriptionelle Regulation (PubMed:11149926). Verwandte Referenzen: PMID:11149926
• Es ist hauptsächlich im ER-Lumen lokalisiert, kann aber auch im Zytosol gefunden werden, wird in den extrazellulären Raum sezerniert, ist mit der Zelloberfläche assoziiert und befindet sich in zytoplasmatischen Vesikeln wie sekretorischen Granula und Lysosomen.
• Calreticulin spielt eine Rolle bei der Calciumhomöostase und ist an der Regulation der mütterlichen Genexpression beteiligt; es kann an der Reifung von Oozyten und der Blockierung der Polyspermie nach der kortikalen Granula-Exozytose beteiligt sein (nach Ähnlichkeit).
• Das Protein enthält eine Signalsequenz, drei Calreticulin-Familien-Wiederholungen und unterliegt posttranslationalen Modifikationen einschließlich Acetylierung, Hydroxylierung, Glykosylierung und Disulfidbrückenbildung, mit Zink- und Calciumbindungseigenschaften.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 18-203, die die N-terminale Domäne und einen Teil der P-Domäne umfassen, die bekanntermaßen hochkonserviert sind. Dieses Design ergibt wahrscheinlich einen Antikörper, der native und denaturierte Formen erkennt und für mehrere Anwendungen geeignet ist.
• Für das Western Blotting (WB) ist eine primäre Bande bei ca. 47 kDa zu erwarten; erwägen Sie die Verwendung reduzierender Bedingungen und validieren Sie im relevanten Zell- oder Gewebslysat. Titrieren Sie die Antikörperverdünnungen, um ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis zu erreichen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) und Immunfluoreszenz (IF/ICC) können Fixierungs- und Permeabilisierungsschritte die Färbung von ER-lokalisiertem Calreticulin beeinflussen; Antigen-Retrieval mit Citratpuffer (pH 6,0) und Blockierung mit Serum sind übliche Verfahren.
• Für ELISA kann dieser monoklonale Antikörper als Capture- oder Nachweisreagenz dienen; für quantitative Assays wird die Paarung mit einem passenden Antikörper oder Kalibrator empfohlen.
• Der KO-Validierungsstatus zeigt an, dass der Antikörper Calreticulin spezifisch erkennt, da das Signal in Knockout-Modellen abgeschafft ist; schließen Sie immer geeignete Kontrollen in Versuchsanordnungen ein.

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