Anti-CAD-Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P27708

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von CAD

• CAD ist ein großes multifunktionales Enzym, das die ersten drei Aktivitäten des de-novo-Pyrimidin-Biosynthesewegs codiert: Carbamoylphosphat-Synthetase (CPSase), Aspartat-Transcarbamylase (ATCase) und Dihydroorotase (DHOase).
• Die CPSase-Aktivität umfasst eine glutaminabhängige Amidotransferase-Domäne (GATase), die Ammoniak erzeugt. Dieses wird anschließend von der Synthetase-Domäne verwendet, um aus ATP und Bicarbonat Carbamoylphosphat zu produzieren.
• Das produzierte Carbamoylphosphat wird zur aktiven Stelle der ATCase geleitet, die die Bildung von Carbamoyl-L-aspartat aus L-Aspartat katalysiert.
• Schließlich zyklisiert die DHOase-Domäne Carbamoylaspartat zu Dihydroorotat, dem Vorläufer der UMP-Synthese.
• CAD ist sowohl im Zytoplasma als auch im Zellkern lokalisiert.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen von CAD gehören Acetylierung und Phosphorylierung, die seine Aktivität und den Stofffluss des Signalwegs regulieren.
• Mutationen im CAD-Gen stehen mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen (CDG1Z) sowie Entwicklungs- und epileptischen Enzephalopathien (DEE50, EIEE50) in Zusammenhang.
• Das Protein hat ein Molekulargewicht von etwa 243 kDa und enthält mehrere Domänen mit Bindungsstellen für ATP, Metallionen (Magnesium, Mangan, Zink) und Nukleotide.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das der N-terminalen Region (AS 1–100) des menschlichen CAD entspricht und wahrscheinlich auf die GATase-Domäne abzielt. Überprüfen Sie die Spezifität in geeigneten Zellmodellen.
• Für den Nachweis des 243-kDa-Proteins im Western Blot sollte ein Polyacrylamidgel mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 6–8 %) sowie verlängerte Transferzeiten verwendet werden, um einen effizienten Transfer sicherzustellen.
• Bei IF/ICC sollten eine Fixierung mit 4 % PFA und eine Permeabilisierung mit 0,1 % Triton X-100 in Betracht gezogen werden, um sowohl zytoplasmatische als auch nukleäre Pools nachzuweisen.
• Für ELISA kann der Antikörper in direkten oder Sandwich-Formaten eingesetzt werden; verwenden Sie das Immunogen-Peptid als Positivkontrolle.
• Die endogene CAD-Expression variiert zwischen verschiedenen Zelltypen. Validieren Sie den Antikörper in Ihrem experimentellen System, beispielsweise in HeLa- oder HEK293-Zellen.
• Die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies als dem Menschen wurde nicht bestimmt. Führen Sie bei der Untersuchung nichtmenschlicher Proben einen Sequenzvergleich durch.

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