Anti-AUH Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q13825

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: AUH-Funktion und -Lokalisierung

• AUH kodiert 3-Methylglutaconyl-CoA-Hydratase, ein mitochondriales Enzym, das auch als AU-spezifische RNA-bindende Enoyl-CoA-Hydratase bekannt ist. Es spielt eine Doppelrolle im Leucin-Katabolismus und im RNA-Stoffwechsel.
• Katalysiert die Hydratisierung von 3-Methylglutaconyl-CoA zu 3-Hydroxy-3-methylglutaryl-CoA (HMG-CoA) im Leucin-Abbauweg, ein Schlüsselschritt für die Ketonkörperproduktion (PubMed:11738050, 12434311, 12655555, 16640564).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:11738050 PMID:12434311 PMID:12655555 PMID:16640564
• Zeigt in vitro eine breitere Substratspezifität, einschließlich Glutaconyl-CoA, Crotonyl-CoA und 3-Methylcrotonyl-CoA, albeit mit geringerer Affinität (PubMed:16640564).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:16640564
• Bindet an AU-reiche Elemente (AREs) in mRNA, was auf eine Rolle bei der Regulation der mRNA-Stabilität und des Abbaus hindeutet (PubMed:7892223).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:7892223
• Könnte als Itaconyl-CoA-Hydratase im C5-Dicarboxylat-Katabolismusweg fungieren und das antimikrobielle Metabolit Itaconat entgiften, das von Makrophagen produziert wird (PubMed:29056341).
  Verwandte Referenzen:
  PMID:29056341
• Lokalisiert predominantly in die mitochondriale Matrix, konsistent mit seinen metabolischen Funktionen.
• Posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, und das Protein unterliegt alternatives Spleißen, was die funktionelle Vielfalt erhöht.
• Genetische Varianten von AUH sind mit Krankheiten assoziiert, was seine klinische Bedeutung unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das verwendete Immunogen entspricht den Aminosäuren 68–339 von menschlichem AUH und deckt einen großen Teil des reifen Proteins ab. Dies kann die Erkennung sowohl nativer als auch denaturierter Konformationen in verschiedenen Anwendungen begünstigen.
• Für Western Blotting wird eine Bande um 36 kDa (oder 35,6 kDa laut UniProt) erwartet. Verwenden Sie mitochondrial angereicherte Lysate oder Zelllinien mit bestätigter AUH-Expression als positive Kontrollen, um die Bandspezifität zu verifizieren.
• In ELISA kann die direkte Beschichtung mit rekombinantem AUH-Protein oder dem Immunogen-Fragment als Fangstrategie dienen. Erwägen Sie die Kombination mit einem Nachweisantikörper, der ein anderes Epitop erkennt, für die Entwicklung eines Sandwich-ELISA.
• Um die Zielspezifität zu bestätigen, wird ein siRNA-vermittelter Knockdown oder ein CRISPR-Knockout von AUH in relevanten Zelllinien empfohlen, um den Signalverlust im WB zu beobachten.
• Angesichts der hohen Sequenzhomologie zwischen menschlichem, murinem und rattem AUH kann der Antikörper mit diesen Spezies kreuzreagieren. Validieren Sie die Reaktivität immer in den entsprechenden Proben der Spezies, wenn Sie mit nicht-menschlichen Systemen arbeiten.

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