Anti-ATR polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q13535

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: ATR-Funktion und Lokalisierung

• ATR ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase, die die Substrat-Konsensussequenz [ST]-Q erkennt und bei DNA-Schäden die Checkpoint-Signalübertragung aktiviert (PubMed:10597277, PubMed:10608806, PubMed:10859164).
  Zugehörige Referenzen: PMID:10597277, PMID:10608806, PMID:10859164

• ATR phosphoryliert mehrere nachgeschaltete Ziele, darunter BRCA1, CHEK1, MCM2, RAD17, RBBP8, RPA2, SMC1 und p53/TP53, wodurch die DNA-Replikation und Mitose gehemmt und gleichzeitig die DNA-Reparatur und Apoptose gefördert werden (PubMed:11114888, PubMed:11418864, PubMed:11865061).
  Zugehörige Referenzen: PMID:11114888, PMID:11418864, PMID:11865061

• Es phosphoryliert die Histonvariante H2AX an Ser-139 an DNA-Schadensstellen und reguliert so die DNA-Schadensantwort (PubMed:11673449).
  Zugehörige Referenzen: PMID:11673449

• Erforderlich für die FANCD2-Ubiquitinierung und entscheidend für die Aufrechterhaltung der Stabilität fragiler Stellen sowie für die effiziente Regulation der Zentrosom-Duplikation (PubMed:15314022, PubMed:12526805).
  Zugehörige Referenzen: PMID:15314022, PMID:12526805

• Wirkt als Regulator des S-G2-Übergangs, indem es die CDK1-Aktivität während der S-Phase einschränkt, um einen vorzeitigen Eintritt in die G2-Phase zu verhindern (PubMed:30139873).
  Zugehörige Referenzen: PMID:30139873

• Lokalisiert an der Kernhülle und fungiert als mechanischer Stresssensor, der die Checkpoint-Signalübertragung über die CHEK1-Phosphorylierung vermittelt; fördert zudem den Bruch der Kernhülle als Reaktion auf DNA-Schäden durch Phosphorylierung von LMNA an Ser-282 (PubMed:25083873, PubMed:37832547).
  Zugehörige Referenzen: PMID:25083873, PMID:37832547

• Beteiligt an der Entzündungsreaktion auf genomische Instabilität: lokalisiert an Mikrokernen und phosphoryliert LMNA an Ser-395, wodurch es für die CDK1-vermittelte Phosphorylierung vorbereitet wird, was zum Bruch der Mikrokernhülle und zur Aktivierung des cGAS-STING-Signalwegs sowie der Typ-I-Interferon-Antwort führt (PubMed:37788673).
  Zugehörige Referenzen: PMID:37788673

• Ubiquitär exprimiert, mit den höchsten Werten im Hoden; Isoform 2 findet sich in Bauchspeicheldrüse, Plazenta und Leber, jedoch nicht in Herz, Hoden und Eierstock.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 400–500 des humanen ATR, einer Region, die an Protein-Protein-Interaktionen beteiligt ist; das polyklonale Serum kann mehrere Epitope innerhalb dieses Fragments erkennen.
• Erwarten Sie beim Western Blot eine spezifische Bande bei ~301 kDa; verwenden Sie einen Marker für hohes Molekulargewicht, ein SDS-PAGE-Gel mit niedrigem Prozentsatz (6 %) und einen verlängerten Nass-Transfer, um die Auflösung und Effizienz des Transfers zu verbessern.
• Validieren Sie die Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-ATR durch Vergleich von Lysaten aus Positivkontrollen; die Sequenzidentität ist hoch, sollte aber mit bekannten Zelllinien oder Geweben bestätigt werden.
• Führen Sie bei der Immunhistochemie (IHC-P) eine Antigen-Demaskierung durch (z. B. Citratpuffer, pH 6,0) und schließen Sie eine Kontrolle ohne Primärantikörper oder mit blockierendem Peptid ein, um die Spezifität der Färbung zu beurteilen.
• Für ELISA kann der Antikörper als Nachweisreagenz verwendet werden; die Paarung mit einem Fänger-Antikörper gegen ein entferntes Epitop kann die Leistung des Assays verbessern; validieren Sie dies mit rekombinanten Proteinstandards.

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