Anti-ATP7B Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P35670

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ATP7B-Funktion und Lokalisierung

• Proteinidentität: ATP7B, auch bekannt als Kupfer-transportierende ATPase 2 oder Morbus-Wilson-assoziiertes Protein, ist eine Kupfer-transportierende P-Typ-ATPase, die durch das ATP7B-Gen (GeneID 540) kodiert wird. Es gehört zur P1B-Unterfamilie der Schwermetall-transportierenden ATPasen.
• Kernfunktion: ATP7B vermittelt den ATP-abhängigen Export von Kupfer aus Zellen, was für die Aufrechterhaltung der Kupferhomöostase entscheidend ist. In Hepatozyten erleichtert es den Kupferausstrom in die Galle, insbesondere bei erhöhten intrazellulären Kupferspiegeln, und verhindert so eine toxische Akkumulation.
• Subzelluläre Lokalisierung: Unter basalen Kupferbedingungen befindet sich ATP7B hauptsächlich in der Membran des trans-Golgi-Netzwerks (TGN), wo es Kupfer für Cuproenzyme bereitstellt. Bei Kupferüberlastung verlagert es sich zu zytoplasmatischen Vesikeln und der Plasmamembran sowie zu späten Endosomen und Mitochondrien, um überschüssiges Kupfer zu exportieren.
• Gewebeexpression: ATP7B ist am häufigsten in Leber und Niere vorhanden, mit geringerer Expression im Gehirn. Auch eine hirnspezifische Isoform (Isoform 2) und eine proteolytisch gespaltene 140-kDa-Form (WND/140 kDa) werden nachgewiesen.
• Posttranslationale Modifikationen und Regulation: Das Protein unterliegt Phosphorylierung und alternatives Spleißen, und ein ribosomales Frameshifting-Ereignis kann zusätzliche Varianten erzeugen. Diese Modifikationen beeinflussen seinen Transport und seine katalytische Aktivität.
• Klinische Relevanz: Mutationen in ATP7B verursachen Morbus Wilson (WD), eine autosomal-rezessive Erkrankung, die durch Kupferakkumulation in Leber und Gehirn gekennzeichnet ist und zu hepatischen und neurologischen Symptomen führt. Der Antikörper zielt auf eine Region nahe dem C-Terminus (aa 1251-1351) ab, die möglicherweise sowohl die vollständige Länge als auch gespaltene Formen erkennt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Immunogen-Design: Das Immunogen umfasst die Aminosäuren 1251–1351 im C-terminalen Bereich, der über Spezies hinweg gut konserviert ist (was die Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte erklärt). Basierend auf Topologiemodellen wird diese Region als zytoplasmatisch vorhergesagt, was möglicherweise Antikörper hervorbringt, die sowohl die vollständige Länge als auch C-terminale Fragmente erkennen.
• Western Blot: Das vorhergesagte Molekulargewicht von ATP7B beträgt ~157 kDa. Verwenden Sie ein Gel mit niedrigem Prozentanteil (z. B. 6–8 %) und stellen Sie angemessene Transferbedingungen sicher (z. B. Nass-Transfer mit Methanolreduktion) für hochmolekulare Proteine. Der Antikörper kann auch die gespaltene 140-kDa-Form (WND/140) in Lebergewebe oder Zelllinien nachweisen.
• IHC-P: Optimieren Sie die Antigen-Demaskierung (z. B. hitzevermittelte Citrat- oder EDTA-Puffer) und schließen Sie geeignete Kontrollen ein (z. B. Lebergewebe als Positivkontrolle, Isotypenkontrolle). Die Färbung in Hepatozyten sollte im TGN lokalisiert sein und eine Umverteilung unter Kupferbelastung zeigen.
• ELISA: Das rekombinante Immunogen kann als Standard für quantitative Assays dienen. Validieren Sie Linearität und Empfindlichkeit mit kupferbeladenen oder ATP7B-überexprimierenden Lysaten.

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