Anti-ATP7A Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB und ELISA - Q04656

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ATP7A-Funktion und -Lokalisierung

• ATP7A, auch bekannt als Kupferpumpe 1 oder Menkes-Krankheit-assoziiertes Protein, ist ein Kupfer-transportierendes ATPase 1, das beim Menschen durch das ATP7A-Gen kodiert wird.
• Es fungiert als ein ATP-getriebene Kupfer-(Cu⁺)-Pumpe, die für die intrazelluläre Kupferionenhomöostase entscheidend ist, indem sie Cu⁺ von zytoplasmatischen Donoren akquiriert und über Membranen transportiert. Verwandte Referenzen: PMID:10419525 PMID:11092760 PMID:28389643
• Der katalytische Zyklus koppelt die ATP-Hydrolyse an den Kupfertransport, wobei eine transiente Phosphorylierung und ein konformationeller Wechsel vom nach innen gerichteten zum nach außen gerichteten Zustand erfolgen. Verwandte Referenzen: PMID:10419525 PMID:19453293 PMID:19917612
• Bei niedrigem zytosolischen Kupfer lokalisiert sich ATP7A an das trans-Golgi-Netzwerk, um Cu⁺ an Kuproenzyme des sekretorischen Weges zu liefern; bei Kupfererhöhung verlagert es sich zur Plasmamembran, um überschüssiges Kupfer zu exportieren. Verwandte Referenzen: PMID:11092760 PMID:28389643 PMID:10419525
• In Neuronen reguliert ATP7A den Kupferefflux und die synaptische Übertragung und liefert Cu⁺ an Enzyme wie PAM, TYR und SOD3, wobei es eine Doppelrolle bei der neuronalen Funktion und dem Überleben spielt. Verwandte Referenzen: PMID:28389643
• In Melanosomen stellt es den Kupfer-Kofaktor für Tyrosinase (TYR) für die Melanin-Biosynthese bereit.
• ATP7A ist weit verbreitet exprimiert, einschließlich in Herz, Gehirn, Lunge, Muskel, Niere und Bauchspeicheldrüse und in geringeren Mengen in der Plazenta; es findet sich auch in Fibroblasten und vaskulären Endothelzellen.
• Das Protein unterliegt einem alternativen Spleißen und ist posttranslationalen Modifikationen wie Phosphorylierung und Glykosylierung unterworfen, mit Rollen in verschiedenen zellulären Kompartimenten einschließlich Golgi, Membran, Endosomen und Synapsen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Dieser Antikörper wird gegen ein rekombinantes Fusionsprotein erzeugt, das dem N-terminalen Bereich (Aminosäuren 1-79) von menschlichem ATP7A entspricht. Erwägen Sie die Überprüfung der Spezifität durch Western-Blot-Analyse unter Verwendung von Zelllinien oder Gewebelysaten, von denen bekannt ist, dass sie ATP7A exprimieren.
• Für Western Blot (WB) wird vorhergesagt, dass ATP7A bei ca. 163 kDa läuft; die Produktspezifikation gibt jedoch einen weiten Bereich von 11-172 kDa an, was möglicherweise Isoformen oder Abbauprodukte widerspiegelt. Optimieren Sie entsprechend den Gelanteil und die Transferbedingungen und verwenden Sie geeignete Proteaseinhibitoren.
• Eine Kreuzreaktivität mit Ratten-ATP7A wurde berichtet; validieren Sie die Leistung in Rattenproben, wenn eine kreuzspezifische Detektion gewünscht ist.
• Für ELISA-Anwendungen sollten Sie eine Reihe von Antikörperverdünnungen testen und geeignete positive und negative Kontrollen verwenden.
• Da ATP7A ein Transmembranprotein ist, kann die Wahl des Lyse-Puffers (z. B. RIPA) und der Probenvorbereitung (mit oder ohne Erhitzen) die Detektion beeinflussen. Bestimmen Sie empirisch die optimalen Bedingungen.

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