Anti-ATP6AP1 Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q15904

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ATP6AP1

• ATP6AP1 (V-Typ Protonen-ATPase-Untereinheit S1), auch bekannt als Ac45, XAP-3 oder ATP6S1, ist eine akzessorische Untereinheit des V0-Komplexes der vakuolären H+-ATPase (V-ATPase). Dieses multimer Enzym koppelt die ATP-Hydrolyse durch den V1-Komplex an die Protonentranslokation durch den V0-Komplex und treibt so die Ansäuerung intrazellulärer Kompartimente an. Verwandte Referenzen: PMID:28296633 PMID:33065002
• Über die Ansäuerung hinaus fungiert der V-ATPase-Komplex als lysosomaler Aktivator von mTORC1, indem es die Guanin-Nukleotid-Austauschfaktor (GEF)-Aktivität des Ragulator-Komplexes fördert und dadurch die Rekrutierung von mTORC1 erleichtert. Verwandte Referenzen: PMID:22053050
• ATP6AP1 führt die V-ATPase in spezialisierte subzelluläre Kompartimente wie neuroendokrine Sekretionsvesikel und die gewellte Grenze von Osteoklasten und reguliert deren Aktivität. Es beteiligt sich außerdem an Membrantrafficking und Ca²⁺-abhängiger Membranfusion. Verwandte Referenzen: PMID:27231034
• Unter aeroben Bedingungen trägt ATP6AP1 zur intrazellulären Eisenhomöostase bei, die die Aktivität von Fe²⁺ Prolylhydroxylase (PHD)-Enzymen auslöst, was zur Hydroxylierung von HIF1A und anschließender proteasomalen Degradation führt. Verwandte Referenzen: PMID:28296633
• Das Protein lokalisiert an der Membran des Endoplasmatischen Retikulums, im ER-Golgi-Zwischenkompartiment und in verschiedenen zytoplasmatischen Vesikeln einschließlich sekretorischen, synaptischen und Clathrin-beschichteten Vesikeln.
• Es ist weit verbreitet exprimiert, mit den höchsten Werten im Gehirn und den niedrigsten in Leber und Zwölffingerdarm, was mit seinen Rollen bei regulierter Sekretion und intrazellulärem Trafficking übereinstimmt.
• Mutationen in ATP6AP1 sind mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen (CDG) verbunden, was seine Bedeutung für die Glykoproteinverarbeitung unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (N-terminales Peptid, Aminosäuren 1–100) zielt auf eine bei Mensch und Maus konservierte Region ab, was die Kreuzreaktivität unterstützt. Validieren Sie in relevanten Probensystemen mit Positivkontrollen (z. B. Gehirngewebslysat), in denen die Expression hoch ist.
• Für Western Blot (WB) erwarten Sie eine Bande bei ca. 52 kDa. Beginnen Sie mit Standard-IgG-Verdünnungen und optimieren Sie empirisch. Eine Negativkontrolle (z. B. siRNA-Knockdown- oder Knockout-Lysat) wird empfohlen, um die Spezifität zu bestätigen.
• Für Immunhistochemie (IHC-P) berücksichtigen Sie Antigen-Retrieval-Schritte und testen Sie auf formalinfixierten paraffineingebetteten Schnitten von Geweben, die bekanntermaßen ATP6AP1 exprimieren, wie Gehirn oder Bauchspeicheldrüse.
• Im ELISA kann der Antikörper als Capture- oder Detektionsreagenz verwendet werden; die Paarung mit einem anderen Klon kann jedoch die Empfindlichkeit verbessern. Titrieren Sie die Antikörperkonzentrationen, um den optimalen Dynamikbereich zu ermitteln.

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