Anti-ATG5 monoklonaler Antikörper für WB, IF-P, IHC-P, IP, ELISA – Q9H1Y0

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ATG5

• Autophagieprotein 5 (ATG5), auch bekannt als APG5-ähnlich, ASP oder hAPG5, ist ein zentrales autophagieassoziiertes Protein, das beim Menschen vom ATG5-Gen (Gen-ID: 9474) kodiert wird.
• ATG5 ist essenziell für die Bildung autophager Vesikel. Es bildet über ein ubiquitin-ähnliches System mit Beteiligung von ATG7 (E1-ähnlich) und ATG10 (E2-ähnlich) eine Konjugation mit ATG12. Das ATG12-ATG5-Konjugat wirkt als E3-ähnliches Enzym für die Lipidierung von Proteinen der ATG8-Familie und erleichtert deren Assoziation mit Vesikelmembranen.
• ATG5 spielt eine entscheidende Rolle bei der mitochondrialen Qualitätskontrolle nach oxidativem Schaden, trägt zur zellulären Langlebigkeit bei und ist an der Lymphozytenentwicklung beteiligt – hier ist es essenziell für das Überleben und die Proliferation von B- und T-Zellen.
• Das Protein wird für eine optimale Antigenprozessierung und -präsentation über MHC II, die Erhaltung der Axonmorphologie und die normale Adipozyten differenzierung benötigt. Es fördert die primäre Ziliogenese, indem es OFD1 von zentriolaren Satelliten entfernt und IFT20 über Autophagie degradiert.
• ATG5 kann auch bei der Apoptose fungieren, möglicherweise im modifizierten Zytoskelett. Seine Expression wird in apoptotischen Zellen downstream der Caspase-Aktivität hochreguliert, und es ist entscheidend für den IFN-gamma-induzierten autophagen Zelltod durch Interaktion mit FADD.
• (Mikrobielle Infektion) ATG5 kann als proviraler Faktor wirken: Es reguliert die angeborene antivirale Immunantwort negativ, indem es die Produktion von Typ-I-IFN nach einer VSV-Infektion beeinträchtigt, und wird für die Initiierung der RNA-Translation und Replikation des Hepatitis-C-Virus benötigt. Verwandte Referenzen: PMID:17709747 PMID:19666601
• Subzellulär lokalisiert sich ATG5 im Zytoplasma und an der Membran der Präautophagosomenstruktur. Auf mRNA-Ebene wird es ubiquitär exprimiert, aber das Protein ist deutlich höher in apoptotischen Zellen exprimiert.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen die Acetylierung und die Bildung einer Isopeptidbindung mit ATG12. Das Protein wird mit Schlüsselwörtern wie Autophagie, Apoptose, Wirt-Virus-Interaktion, Immunität und Neurodegeneration assoziiert.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches Peptid im Bereich der Aminosäuren 1–100 von menschlichem ATG5. Validieren Sie die Spezifität mit ATG-Knockout-Zelllinien oder siRNA-Knockdown.
• Für den Western Blot (WB)-Nachweis ist eine Bande um 32–35 kDa zu erwarten (ATG5-Monomer; konjugiertes ATG12-ATG5 wandert höher bei ~55 kDa). Erwägen Sie Tests in autophagieinduzierten Proben (z. B. gehungert oder mit Rapamycin behandelt), um das Signal zu verstärken.
• Bei Immunfluoreszenz (IF) und Immunhistochemie (IHC) zeigt ATG5 zytoplasmatische punktförmige Färbung, die nach Autophagieinduktion akkumuliert; optimieren Sie Fixierung und Permeabilisierung, um Autophagosomenstrukturen zu erhalten.
• Für die Immunpräzipitation (IP) kann der Antikörper sowohl freies ATG5 als auch das ATG12-ATG5-Konjugat binden; sorgen Sie für geeignete Lysebedingungen, um Protein-Protein-Interaktionen nachzuweisen.
• Kreuzreaktivität mit Maus und Ratte ist aufgrund der Sequenzhomologie zu erwarten; überprüfen Sie trotzdem die Leistungsfähigkeit im Kontext der jeweiligen Spezies und des Gewebes.

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