Anti-ATG4D Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q86TL0

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ATG4D-Funktion und -Lokalisierung

• ATG4D ist eine Cysteinprotease, die eine Schlüsselrolle in der Autophagie spielt, indem sie sowohl die proteolytische Aktivierung als auch die Delipidierung von ATG8-Familienproteinen vermittelt. Sie spaltet die C-terminale Aminosäure von MAP1LC3 und GABARAPL2 ab, um eine Glycinrest freizulegen, der für die Konjugation mit Phosphatidylethanolamin (PE) und den Membraneinbau essentiell ist. Verwandte Referenzen: PMID:211778865
• Zusätzlich zur proteolytischen Aktivierung katalysiert ATG4D die Delipidierung von PE-konjugierten ATG8-Proteinen während der Makroautophagie und von Phosphatidylserin (PS)-konjugierten ATG8-Proteinen in der nicht-kanonischen Autophagie und wirkt dabei als das Haupt-Delipidierungsenzym unter den ATG4-Familienmitgliedern. Verwandte Referenzen: PMID:29458288, PMID:33909989
• ATG4D ist am Wachstum der Phagophor während der Mitophagie unabhängig von seiner Proteaseaktivität beteiligt, indem es den Transport von ATG9A zu den Mitochondrien reguliert und Phagophor-Endoplasmic-Reticulum-Kontakte während des Lipidtransfers fördert. Verwandte Referenzen: PMID:33773106
• Das Protein wirkt als Autophagieregulator, der mitochondriale Dysfunktion mit Apoptose verbindet; sein mitochondrialer Import während zellulärem Stress und Differenzierung beeinflusst die Physiologie der Mitochondrien, die ROS-Spiegel, die Mitophagie und die Zellviabilität.
• Subzellulär lokalisiert ATG4D im Zytoplasma und in der mitochondrialen Matrix, was seinen dualen Rollen in der Autophagie und der mitochondrialen Regulation entspricht.
• Es ist weit verbreitet exprimiert, mit bemerkenswerter Expression im Hoden, und unterliegt alternativem Spleißen. Posttranslationale Modifikationen umfassen Phosphorylierung.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (Aminosäuren 1-230) von humanem ATG4D. Berücksichtigen Sie bei der Arbeit mit Proben, dass diese Region über Isoformen oder Spezies hinweg konserviert sein kann, und validieren Sie die Bandenmuster entsprechend.
• Für Western Blotting (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht ca. 53 kDa, aber endogenes ATG4D kann einer proteolytischen Verarbeitung oder Modifikation unterliegen; validieren Sie die Bandengrößen mithilfe geeigneter Positivkontrollen und Lysaten aus humanen oder murinen Zellen.
• Bei der Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) sollten Sie zytoplasmatische und mitochondriale Färbemuster bewerten. Eine Optimierung der Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen kann erforderlich sein, um mitochondrial lokalisiertes ATG4D nachzuweisen.
• Für ELISA-Anwendungen kann der Antikörper zum Nachweis von rekombinantem oder endogenem ATG4D verwendet werden; stellen Sie Standardkurven mit bekannten Antigenkonzentrationen auf und berücksichtigen Sie die Kreuzreaktivität mit verwandten ATG4-Familienmitgliedern bei Multiplexing.

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