Anti-Asymmetrisches DiMethyl-Histon H3-R17 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (Q16695/P68431) für WB, IF/ICC, ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von asymmetrisch dimethyliertem Histon H3-R17

• Histon H3 ist eine Kernkomponente des Nukleosoms, wickelt DNA zu Chromatin und spielt eine zentrale Rolle bei der Transkriptionsregulation, DNA-Reparatur, DNA-Replikation und chromosomalen Stabilität. Posttranslationale Modifikationen (PTMs) von Histonen, zusammenfassend als Histon-Code bekannt, steuern die Zugänglichkeit und Funktion von Chromatin.
• Die asymmetrische Dimethylierung von Histon H3 an Arginin 17 (H3R17me2a; entspricht Position 18 in der kanonischen UniProt-Sequenz) wird durch die Protein-Arginin-Methyltransferase CARM1 (Coaktivator-assoziierte Arginin-Methyltransferase 1) katalysiert. Diese Modifikation ist mit transkriptioneller Aktivierung und der Rekrutierung von Coaktivator-Komplexen assoziiert.
• Sowohl das kanonische Histon H3.1 (kodiert durch mehrere Gene wie H3C1, H3C2, etc.; UniProt P68431) als auch die testisspezifische Variante H3.1t (H3-4; UniProt Q16695) tragen diese Modifikation. H3.1t wird in testikulären Zellen exprimiert, während H3.1 ubiquitär in somatischen Zellen exprimiert wird.
• Histon H3 ist im Zellkern lokalisiert und hauptsächlich in Nukleosomen entlang der Chromosomen zu finden. Der N-terminale Schwanz, an dem R17 liegt, ragt aus dem Nukleosomenkern heraus und ist ein Hotspot für zahlreiche PTMs, die die Genexpression regulieren.
• Das synthetische Peptid-Immunogen entspricht den ersten 100 Aminosäuren von humanem Histon H3, einer Region, die unter Eukaryoten hochkonserviert ist, was die vorhergesagte breite Kreuzreaktivität dieses Antikörpers erklärt. Verwandte Referenzen:
• PMID:15345777
• PMID:15471871
• PMID:16497732
• UniProt Q16695
• UniProt P68431

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blotting (WB) werden säureextrahiertes Histon oder Gesamtzelllysate aus relevanten Zelllinien empfohlen. Das erwartete Molekulargewicht von Histon H3 beträgt etwa 15 kDa. Erwägen Sie die Verwendung von Peptid-Kompetitions-Assays oder CARM1-Knockout-Proben, um die Detektionsspezifität für die asymmetrische Dimethyl-R17-Modifikation zu bestätigen.
• Bei Immunfluoreszenz/Immunzytochemie (IF/ICC) beeinflussen Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen die Epitopzugänglichkeit erheblich. Methanol-Fixierung verstärkt oft das Kernsignal; optimieren Sie die Antikörperverdünnung und Blockierschritte, um den Hintergrund zu minimieren.
• Für ELISA kann der Antikörper mit synthetischen Peptiden verwendet werden, um asymmetrisch dimethyliertes R17 von symmetrisch dimethyliertem oder unmodifiziertem H3-Peptid zu unterscheiden. Schließen Sie geeignete Kontrollen ein, um die Spezifität sicherzustellen.
• Aufgrund der vorhergesagten breiten Kreuzreaktivität sollte der Antikörper in Ihrem spezifischen Spezies- und Gewebemodell validiert werden, bevor er für kritische Experimente eingesetzt wird.
• Dieser Antikörper gehört zur Kategorie der methylierten Antikörper und eignet sich für die epigenetische Forschung. Obwohl er hier nicht für Chromatin-Immunpräzipitation (ChIP) oder Multiplex-Analysen validiert ist, kann er mit anderen histonmodifikationsspezifischen Reagenzien für solche Anwendungen bei entsprechender Optimierung integriert werden.

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