Anti-ASMT Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - P46597

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ASMT-Funktion und -Lokalisierung

• ASMT (Acetylserotonin O-Methyltransferase), auch bekannt als Hydroxyindole O-Methyltransferase (HIOMT), ist das Schlüsselenzym, das den letzten Schritt der Melatonin-Biosynthese katalysiert: die Übertragung einer Methylgruppe von S-Adenosyl-L-Methionin auf N-Acetylserotonin zur Produktion von Melatonin (N-Acetyl-5-Methoxytryptamin).
• Das ASMT-Gen unterliegt alternatives Spleißen, was zu mehreren Transkriptvarianten führt, die unterschiedliche Proteinisoformen kodieren.
• Auf Proteinebene wird ASMT vorwiegend in der Zirbeldrüse exprimiert, wo es eine kritische Rolle bei der Regulierung zirkadianer Rhythmen und der saisonalen Fortpflanzung über die Melatonin-Sekretion spielt.
• In der Netzhaut wurde eine sehr niedrige mRNA-Expression nachgewiesen, aber das ASMT-Protein fehlt, was auf eine gewebespezifische Regulation dieses Enzyms hinweist. Verwandte Referenzen: PMID:7989373 PMID:8574683
• ASMT gehört zur Superfamilie der Methyltransferasen und benötigt S-Adenosyl-L-Methionin als Methylspender für seine katalytische Aktivität.
• Das Protein ist unter dem Stoffwechsel von Lipiden annotiert, was auf ein potenzielles Bindeglied zwischen der Melatonin-Synthese und breiteren Stoffwechselwegen hinweist.
• Strukturuntersuchungen (belegt durch 3D-Struktur-Annotationen) haben die Architektur des aktiven Zentrums des Enzyms aufgeklärt und die Erforschung seines katalytischen Mechanismus und die Design von Inhibitoren erleichtert.
• Massenspektrometrie-basierte Proteomik hat die ASMT-Expression in der Zirbeldrüse bestätigt und ihre Nützlichkeit als Biomarker für die Zirbeldrüsenfunktion unterstützt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das verwendete Immunogen ist ein rekombinantes Fusionsprotein, das die Aminosäuren 1-298 von menschlichem ASMT (NP_001164510.1) abdeckt. Diese nahezu vollständige Sequenz wird wahrscheinlich Antikörper erzeugen, die mehrere lineare Epitope erkennen, was es für die Detektion von denaturiertem Protein im Western Blot geeignet macht.
• Für IHC-P sollten Sie die Bedingungen für die Antigen-Retrieval und die Antikörperverdünnung optimieren, da polyklonale Antikörper in formalinfixierten, in Paraffin eingebetteten Geweben einen höheren Hintergrund aufweisen können.
• Im ELISA kann der Antikörper rekombinantes oder natives ASMT nachweisen; jedoch sollte die Kreuzreaktivität mit anderen Methyltransferasen validiert werden, insbesondere beim Testen von Proben von Spezies mit hoher Sequenzhomologie.
• Bei Verwendung dieses Antikörpers in Maus- oder Rattengeweben sollte die Kreuzreaktivität durch Sequenzalignment oder vorläufige Titration bestätigt werden, da das Immunogen menschlichen Ursprungs ist.
• Für WB ist ein Band bei ca. 38 kDa zu erwarten; zusätzliche Bänder durch Isoformen oder posttranslationale Modifikationen können auftreten und sollten mit geeigneten Kontrollen verifiziert werden.

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