Anti-ASAH1 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - Q13510

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ASAH1 (Saure Ceramidase) Funktion und Lokalisierung

• ASAH1 kodiert ein lysosomales Enzym, das bei saurem pH-Wert Ceramide in Sphingosin und freie Fettsäuren hydrolysiert, mit höherer katalytischer Effizienz gegenüber C12-Ceramiden (PubMed:10610716, PubMed:15655246, PubMed:7744740). Verwandte Referenzen: PMID:10610716 PMID:15655246 PMID:7744740
• Das Enzym katalysiert auch die Rückreaktion und synthetisiert Ceramide aus Sphingosin und Fettsäuren, mit einer Präferenz für D-Erythro-Sphingosin und C12- oder C14-Fettsäuren (PubMed:12764132, PubMed:12815059). Verwandte Referenzen: PMID:12764132 PMID:12815059
• ASAH1 zeigt auch N-Acylethanolamin-Hydrolase-Aktivität und trägt zur Regulation bioaktiver Lipid-Signalmoleküle bei (PubMed:15655246). Verwandte Referenzen: PMID:15655246
• Durch die Regulation von Ceramid-, Sphingosin- und Sphingosin-1-Phosphat-Spiegeln in der Epidermis vermittelt ASAH1 die Kalzium-induzierte Differenzierung epidermaler Keratinozyten (PubMed:17713573). Verwandte Referenzen: PMID:17713573
• ASAH1 reguliert indirekt den durch Tumornekrosefaktor (TNF) induzierten Apoptose über das Ceramid- und Sphingosin-Gleichgewicht (By similarity).
• In adrenokortikalen Zellen kann ASAH1 die Steroidogenese direkt regulieren, indem es an den nukleären Rezeptor NR5A1 bindet und dessen transkriptionelle Aktivität negativ reguliert (PubMed:22261821). Verwandte Referenzen: PMID:22261821
• Die subzelluläre Lokalisierung umfasst das Lysosom, aber ASAH1 kann auch im Zellkern, im Zytoplasma und sekretiert gefunden werden.
• ASAH1 wird breit exprimiert, mit höherer Expression im Herzen.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (Aminosäuren 140–389) deckt einen großen Teil der reifen sauren Ceramidase-Sequenz ab; dieses Design kann Antikörper hervorbringen, die sowohl die Vorläuferform in voller Länge als auch prozessierte Formen erkennen. Eine Validierung des Nachweises von Isoformen in Ihrem Proben-System sollte in Betracht gezogen werden.
• Für Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 45 kDa, aber die Prozessierung kann kleinere Fragmente erzeugen. Verwenden Sie reduzierende Bedingungen und überprüfen Sie die Bandenmuster mit geeigneten Kontrollen, insbesondere in humanen, murinen oder Ratten-Lysaten.
• Bei IF/ICC-Experimenten sollten optimale Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen ermittelt werden, um die lysosomale Lokalisierung zu erhalten. Eine Ko-Färbung mit Organellen-Markern kann helfen, die Spezifität zu bestätigen.
• Bei der Verwendung dieses Antikörpers in ELISA sollte aufgrund seiner polyklonalen Natur die Verwendung als Capture- oder Detektionsreagenz optimiert werden; die Paarung mit einem monoklonalen Antikörper kann das Signal-Rausch-Verhältnis verbessern. Optimieren Sie die Beschichtungs- und Blockierungsbedingungen für Ihr spezifisches Assay-Format.

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