Anti-ARF5 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - P84085

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: ARF5-Funktion und Lokalisierung

• ARF5 ist ein Mitglied der ADP-Ribosylierungsfaktor (ARF)-Familie kleiner GTPasen, die eine wesentliche Rolle beim intrazellulären vesikulären Transport und der Organellstruktur spielen.
• Es fungiert als GTP-bindendes Protein, das zur Vesikelknospung und -enthüllung am Golgi-Apparat beiträgt und den Proteintransport zwischen dem endoplasmatischen Retikulum und dem Golgi vermittelt.
• ARF5 reguliert die mTORC1-Aktivität, indem es die Rekrutierung von mTORC1 an Plasmamembran-Rüschen fördert und so dessen Aktivierung über den PI3K/Akt-Signalweg erleichtert. Verwandte Referenzen: PMID:36735494
• Es fungiert als Frühwarnsystem bei lysosomalen Schäden und ist an lysosomalen Qualitätskontrollwegen beteiligt, was seine Rolle bei der Aufrechterhaltung der zellulären Homöostase unterstreicht. Verwandte Referenzen: PMID:41293316
• Während einer mikrobiellen Infektion dient ARF5 als allosterischer Aktivator der katalytischen Untereinheit des Cholera-Toxins, einer ADP-Ribosyltransferase, was auf seine Beteiligung an Wirt-Pathogen-Interaktionen hinweist.
• Das Protein lokalisiert in mehreren zellulären Kompartimenten, einschließlich der Zellmembran, dem Golgi-Apparat, der Trans-Golgi-Netzwerk-Membran, dem Zytoplasma (perinukleäre Region) und der Lysosomenmembran.
• ARF5 ist durch posttranslationale Modifikationen wie N-Myristoylierung gekennzeichnet, die es an Membranen verankert, und es enthält konservierte GTP-Bindungsdomänen, die für seine regulatorischen Funktionen wesentlich sind.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht der N-terminalen Region (Aminosäuren 1-180) von humanem ARF5. Diese Region umfasst die konservierte GTP-Bindungsdomäne und erkennt wahrscheinlich die vollständige Länge von ARF5. Ziehen Sie für die Western-Blot-Validierung die Verwendung eines Positivkontroll-Lysats aus HeLa-, HEK293- oder anderen humanen Zelllinien, die ARF5 exprimieren, in Betracht.
• Für den Western Blot beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht von ARF5 etwa 21 kDa. Verwenden Sie reduzierende SDS-PAGE-Bedingungen und einen Standard-Blockierungspuffer. Optimieren Sie die Primärantikörperverdünnung empirisch zwischen 1:500 und 1:2000 und schließen Sie einen speziesgerechten Sekundärantikörper ein.
• Der Antikörper ist für ELISA-Anwendungen geeignet. Führen Sie für direkten oder Sandwich-ELISA eine Titration des Antikörpers gegen das als Immunogen verwendete rekombinante Protein oder gegen Zelllysate durch, um die optimalen Beschichtungs- und Nachweiskonzentrationen zu bestimmen.
• Es wird über Kreuzreaktivität mit humanem, Maus- und Ratten-ARF5 berichtet. Wenn Sie mit Maus- oder Rattenproben arbeiten, validieren Sie den Antikörper in Ihrem spezifischen Modellsystem, da sich posttranslationale Modifikationen oder Proteinexpressionsniveaus unterscheiden können.

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