Anti-ARF5 monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA – P84085

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ARF5

• ADP-Ribosylierungsfaktor 5 (ARF5) ist ein kleines GTP-bindendes Protein, das zwischen aktivem GTP-gebundenem und inaktivem GDP-gebundenem Zustand wechselt und als molekularer Schalter im intrazellulären Transport fungiert.
• ARF5 spielt eine Schlüsselrolle im Proteintransport und trägt zur Vesikelknospung und -enthüllung am Golgi-Apparat bei.
• Es reguliert die mTORC1-Aktivität, indem es die Rekrutierung des mTORC1-Komplexes zu Plasmamembran-Ruffles fördert und die Aktivierung über den PI3K/Akt-Signalweg erleichtert. Verwandte Referenzen: PMID:36735494
• ARF5 wirkt als früher Responder auf lysosomale Schäden und beteiligt sich an Pfaden der lysosomalen Qualitätskontrolle. Verwandte Referenzen: PMID:41293316
• Bei mikrobiellen Infektionen fungiert ARF5 als allosterischer Aktivator der katalytischen Untereinheit von Choleratoxin, einer ADP-Ribosyltransferase.
• ARF5 ist in mehreren Zellkompartimenten lokalisiert, darunter der Golgi-Apparat (Trans-Golgi-Netzwerk-Membran), die Zellmembran, das Zytoplasma (perinukleäre Region) und die Lysosomenmembran, was seine dynamischen Transportfunktionen widerspiegelt.
• Es ist ein myristoyliertes Lipoprotein, an dessen N-Terminus eine Myristoylgruppe gebunden ist, was wahrscheinlich die Membranassoziation erleichtert.
• Das Protein hat ein berechnetes Molekulargewicht von etwa 20,5 kDa und gehört zur ARF-Familie kleiner GTPasen.

Experimentelle Anleitung und Technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 81–180 von menschlichem ARF5, das bei Mensch, Maus und Ratte konserviert ist; daher kann der Antikörper ARF5 bei diesen Spezies nachweisen, aber die Kreuzreaktivität sollte im entsprechenden Experimentalsystem validiert werden.
• Für Western Blot (WB) wird ARF5 bei ~21 kDa vorausgesagt; verwenden Sie geeignete Positivkontrollen (z. B. HeLa-, HEK293-Zelllysate) und bestätigen Sie die Bandspezifität mit siRNA- oder Knockout-Validierung.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) lokalisiert sich ARF5 zum Golgi-Apparat und zytoplasmatischen Vesikeln; Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen sollten für Golgi-Marker optimiert werden, und eine Co-Färbung mit Organellen-Markern wird empfohlen.
• Für ELISA kann der Antikörper als Detektions- oder Fangreagenz verwendet werden; für Sandwich-ELISA-Setups kann die Paarung mit einem geeigneten ARF5-Antikörperpaar erforderlich sein.
• Da ARF5 ein myristoyliertes membranassoziiertes Protein ist, können Extraktionspuffer mit milden Detergenzien die Löslichkeit verbessern, ohne die Epitoperkennung zu stören.

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