Anti-APTX Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, IP, ELISA - Q7Z2E3

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: APTX-Funktion und Lokalisierung

• Aprataxin (APTX), auch bekannt als Forkhead-assoziiertes Domänen-Histidin-Triad-ähnliches Protein (FHA-HIT), ist ein DNA-bindendes Protein, das an der Reparatur von Einzelstrangbrüchen, Doppelstrangbrüchen und der Basenexzisionsreparatur beteiligt ist (PubMed:15044383, PubMed:15380105, PubMed:16964241). Es löst abortive DNA-Ligationszwischenprodukte auf, indem es die Freisetzung von Adenylatgruppen von 5'-Phosphat-Termini katalysiert und so 5'-Phosphat-Termini erzeugt, die effizient wieder verknüpft werden können (PubMed:16964241, PubMed:17276982, PubMed:24362567). Verwandte Referenzen: PMID:15044383, PMID:15380105, PMID:16964241, PMID:17276982, PMID:24362567

• APTX hydrolysiert auch Adenosin-5'-monophosphoramidat (AMP-NH(2)) und Diadenosintetraphosphat (AppppA), allerdings mit geringerer katalytischer Aktivität (PubMed:16547001). Es zeigt eine höhere spezifische Aktivität mit 5'-gebundenem Adenosin (AppDNA) im Vergleich zu 3'-gebundenen Guanosin- oder Inosin-DNA-Addukten (By similarity). Verwandte Referenzen: PMID:16547001

• Das Protein lokalisiert überwiegend im Zellkern, einschließlich Nukleoplasma und Nukleolus, wird aber auch im Zytoplasma nachgewiesen.

• APTX enthält eine Zinkfinger- und eine FHA-Domäne und benötigt Metallionenbindung für seine Aktivität. Es unterliegt Phosphorylierung (Phosphoprotein-Keyword).

• Isoform 1 wird im Vergleich zu Isoform 2 hoch in der Großhirnrinde und im Kleinhirn exprimiert. APTX wird in vielen Geweben exprimiert, wie z.B. Leber, Niere, Lymphknoten, Skelettmuskel, Fibroblasten, Lymphozyten und Pankreas (PubMed:14755728, PubMed:11586299, PubMed:11586300, PubMed:15276230). Verwandte Referenzen: PMID:14755728, PMID:11586299, PMID:11586300, PMID:15276230

• Mutationen in APTX verursachen Ataxie mit okulomotorischer Apraxie Typ 1 (AOA1), eine neurodegenerative Erkrankung, was seine essentielle Rolle bei der neuronalen DNA-Reparatur unterstreicht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen (rekombinantes Protein, das die Aminosäuren 93-342 von humanem APTX umfasst) deckt die katalytische HIT-Domäne ab; der resultierende polyklonale Antikörper kann daher beide Isoformen erkennen. Überprüfen Sie die Isoformenerkennung in Ihrem Probensystem.
• Für den Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht 41 kDa, aber posttranslationale Modifikationen können zu leichten Verschiebungen führen. Verwenden Sie geeignete positive Kontrollen (z.B. HeLa-, HEK293-Lysate) und validieren Sie gegebenenfalls mit siRNA-Knockdown.
• Bei der Immunfluoreszenz (IF/ICC) ist eine Kernfärbung mit möglicher Anreicherung im Nukleolus zu erwarten. Gegenfärbung mit einem Nukleolus-Marker (z.B. Fibrillarin) zur Bestätigung der Lokalisierung durchführen.
• Für die Immunpräzipitation (IP) kann der Antikörper APTX und seine an der DNA-Reparatur beteiligten Interaktionsproteine einfangen. Optimieren Sie die Lysis-Puffer-Bedingungen (z.B. Salzkonzentration, Detergens), um Proteinkomplexe zu erhalten.
• ELISA-Anwendungen können unter Verwendung von rekombinantem APTX-Protein oder Peptid als Standard entwickelt werden. Titrieren Sie den Antikörper für ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis.
• Dieser Antikörper ist für humane Reaktivität validiert; die Kreuzreaktivität mit anderen Spezies wurde nicht bestimmt. Bei Verwendung nicht-humaner Proben wird eine Sequenzalignment der Immunogenregion empfohlen.

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