Anti-APP Kaninchen polyklonaler Antikörper (KO validiert) für WB, ELISA - P05067

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von APP

• Amyloid-beta-Vorläuferprotein (APP) ist ein transmembranes Glykoprotein mit mehreren Isoformen, die durch alternatives Spleißen entstehen; die wichtigste neuronale Isoform ist APP695, während APP751 und APP770 in nicht-neuronalen Zellen exprimiert werden und Appican in Astrozyten vorkommt.
• APP fungiert als Zelloberflächenrezeptor, der an Neuritenwachstum, neuronale Adhäsion und Axonogenese beteiligt ist; Wechselwirkungen zwischen APP-Molekülen auf benachbarten Zellen fördern die Synaptogenese.
  Verwandte Referenzen: PMID:25122912
• APP dient als Kinesin-I-Membranrezeptor und vermittelt den axonalen Transport von Beta-Sekretase und Presenilin 1, was für den Frachttransport zu Synapsen entscheidend ist.
  Verwandte Referenzen: PMID:17062754, PMID:23011729
• Die aus der APP-Proteolyse stammenden Amyloid-beta-Peptide sind lipophile Metallchelatoren, die Kupfer, Zink und Eisen binden und Cu²⁺ sowie Fe³⁺ reduzieren können; sie fördern die Tau-Aggregation und TPK II-vermittelte Phosphorylierung, und ihre Interaktion mit überexprimiertem HADH2 trägt zu oxidativem Stress bei.
• Gamma-CTF-Peptide und Caspase-gespaltene Fragmente wie C31 sind starke Verstärker der neuronalen Apoptose.
• APP enthält in einigen Isoformen eine Kunitz-Typ-Serinproteaseinhibitor (BPTI)-Domäne, die Proteaseinhibitoraktivität verleiht, und es erfährt umfangreiche posttranslationale Modifikationen einschließlich N- und O-Glykosylierung, Phosphorylierung und Sulfatierung.
• Subzellulär ist APP in der Zellmembran, an Clathrin-beschichteten Vertiefungen, frühen Endosomen, im Endoplasmatischen Retikulum, Golgi-Apparat, zytoplasmatischen Vesikeln lokalisiert und wird auch sezerniert; es kann im Kern und im Zytoplasma nachgewiesen werden.
• APP wird im Gehirn und im Liquor exprimiert, mit den höchsten Gehalten im Frontallappen der Hirnrinde; es findet sich auch in Niere, Herz, Milz und Plasma. Die Isoform APP695 dominiert in Neuronen, während APP751 und APP770 in nicht-neuronalen Zellen exprimiert werden (PubMed:2649245).
  Verwandte Referenzen: PMID:2649245

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Aufgrund des Immunogensdesigns (Aminosäuren 1-100 von humanem Aβ42 wird erwartet, dass der Antikörper im Western Blot sowohl das volllängige APP (~87 kDa) als auch proteolytische Fragmente mit Amyloid-beta wie CTF99, CTF83 und Aβ-Peptide erkennt. Angesichts des KO-validierten Status kann eine Validierung in Proben vom Wildtyp versus APP-Knockout-Proben zur Bestätigung der Spezifität beitragen.
• Für ELISA erwägen Sie die Paarung dieses polyklonalen Antikörpers mit einem monoklonalen Antikörper, der ein anderes APP-Epitop erkennt, um einen empfindlichen Sandwich-Assay zu entwickeln. Eine Optimierung der Beschichtungs- und Nachweisbedingungen wird empfohlen.
• Obwohl der Antikörper gegen humanes APP erhoben wurde und Kreuzreaktivität mit menschlichen Proben zeigt, sollten Anwender, die mit anderen Arten arbeiten, aufgrund potenzieller Sequenzunterschiede eine entsprechende Validierung durchführen.
• Der Antikörper wird auf Eispack versandt, um die Stabilität zu gewährleisten; nach Erhalt aliquotieren Sie ihn und lagern Sie ihn bei -20°C oder -80°C, um wiederholte Gefrier-Auftau-Zyklen zu vermeiden.

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