Anti-APOE monoklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P02649

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: APOE-Funktion und Lokalisation

• APOE (Apolipoprotein E) ist ein Kernbestandteil von Plasmalipoproteinen und fungiert hauptsächlich beim lipoproteingebundenen Lipidtransport zwischen Organen über Plasma und interstitielle Flüssigkeit. Es ist an der Bildung, Umwandlung und Clearance von Chylomikronen, VLDL, IDL und HDL-Partikeln beteiligt (PubMed:14754908, PubMed:1911868, PubMed:6860692, PubMed:1917954). Zugehörige Referenzen: PMID:14754908, PMID:1911868, PMID:6860692, PMID:1917954

• APOE bindet an zelluläre Rezeptoren wie LDLR, LRP1, LRP2, LRP8 und VLDLR, um die Aufnahme von APOE-haltigen Lipoproteinpartikeln zu vermitteln. Es verfügt zudem über eine Heparin-bindende Aktivität, die die Zelloberflächenbindung über Heparansulfat-Proteoglycane unterstützt (PubMed:12950167, PubMed:1530612, PubMed:1917954, PubMed:23676495, PubMed:7635945, PubMed:9395455). Zugehörige Referenzen: PMID:12950167, PMID:1530612, PMID:1917954, PMID:23676495, PMID:7635945, PMID:9395455

• Es spielt eine entscheidende Rolle im reversen Cholesterintransport, indem es an der ABCA1-vermittelten HDL-Biogenese teilnimmt und die hepatische Aufnahme von HDL vermittelt. Dadurch trägt es zur Cholesterinhomöostase bei (PubMed:14754908, PubMed:23620513, PubMed:9395455). Zugehörige Referenzen: PMID:14754908, PMID:23620513, PMID:9395455

• Im zentralen Nervensystem ist APOE wichtig für den Lipidtransport, reguliert das Überleben und Aussprossen von Neuronen und kann die Pathogenese der Alzheimer-Krankheit durch rezeptorabhängige Transkriptionsregulation von APP beeinflussen (PubMed:25173806, PubMed:8939961, PubMed:28111074). Zugehörige Referenzen: PMID:25173806, PMID:8939961, PMID:28111074

• APOE wird sekretiert und findet sich im extrazellulären Raum, der extrazellulären Matrix und endosomalen Multivesikulärkörpern. Es wird hauptsächlich von Leberhepatocyten produziert, kommt aber auch im Gehirn (Astrocyten, Neuronen), Nebennieren, Niere, Milz und Fettgewebe vor (PubMed:25173806, PubMed:10027417, PubMed:3115992). Zugehörige Referenzen: PMID:25173806, PMID:10027417, PMID:3115992

• APOE ist an angeborenen und adaptiven Immunantworten beteiligt, bindet an den Immunzellrezeptor LILRB4 und kontrolliert das Überleben von myeloischen Suppressorzellen. Es nimmt zudem an der HCV-Infektion teil, indem es mit viralen Hüllglykoprotein E2 interagiert (PubMed:30333625, PubMed:25122793, PubMed:29695434). Zugehörige Referenzen: PMID:30333625, PMID:25122793, PMID:29695434

• Posttranslationale Modifikationen umfassen Glykosylierung, Phosphorylierung und Oxidation; es ist anfällig für Glykierung, und Varianten sind mit Hyperlipidämie und Alzheimer-Krankheit assoziiert.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das die Aminosäuren 19-317 von humanem APOE umfasst und den Großteil des reifen Proteins einschließlich der rezeptorbindenden Region abdeckt. Dieses Design kann es dem Antikörper ermöglichen, sowohl lipidfreie als auch lipidgebundene APOE-Konformationen zu erkennen.
• Beim Western Blot wird APOE bei einer scheinbaren Molekularmasse von ~36 kDa nachgewiesen; erwägen Sie eine Validierung in Proben aus Leber, Gehirn oder Plasma, wo APOE hoch exprimiert ist. Verwenden Sie geeignete reduzierende Bedingungen, da APOE disulfidverknüpfte Komplexe bilden kann.
• Bei Immunfluoreszenz/ICC ist zu beachten, dass APOE primär sekretiert wird; möglicherweise ist eine Optimierung von Fixierung und Permeabilisierung erforderlich, um intrazelluläre Pools sichtbar zu machen. Eine Co-Färbung mit Organellenmarkern (z. B. ER, Golgi oder Endosomen) wird empfohlen.
• Für ELISA kann APOE in Serum/Plasma oder Zellkulturüberständen quantifiziert werden; jedoch können hohe endogene Spiegel im Serum eine Verdünnungsoptimierung und sorgfältige Erstellung der Standardkurve erfordern.
• Aufgrund der Rolle von APOE-Isoformen bei Krankheiten sollten Forscher eine isoformspezifische Validierung in Betracht ziehen, falls der Antikörper gemeinsame Epitope erkennt; dieser Antikörper wurde gegen die Referenzsequenz (NP_000032.1) hergestellt, die der APOE3-Isoform entspricht.

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