Anti-ApoB polyklonaler Kaninchen-Antikörper (WB, IF/ICC, ELISA) - P04114

Wichtige Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Apolipoprotein B-100

• Apolipoprotein B (ApoB) ist ein Hauptproteinbestandteil von Chylomikronen (apoB-48), LDL (apoB-100) und VLDL (apoB-100). ApoB-48 und apoB-100 stammen aus demselben Gen durch RNA-Editing.
• ApoB-100 fungiert als Erkennungssignal für die zelluläre Bindung und Internalisierung von LDL-Partikeln durch den apoB/E-Rezeptor und spielt eine entscheidende Rolle bei der Cholesterinhomöostase.
• Subzellulär lokalisiert ApoB-100 im Zytoplasma, wird sezerniert und assoziiert mit Lipidtröpfchen, was seine Rolle bei der Assemblierung und Sekretion von Lipoproteinen widerspiegelt.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Acetylierung, Disulfidbrückenbildung, Glykosylierung, Palmitoylierung und Phosphorylierung, die seine Funktion und Stabilität regulieren können.
• ApoB-100 enthält Heparin-bindende Domänen und ist an Atherosklerose beteiligt, was es zu einem wichtigen Ziel in der Herz-Kreislauf-Forschung macht.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Für Western Blot (WB): Aufgrund des hohen Molekulargewichts (~516 kDa) sollten Polyacrylamidgele mit niedrigem Prozentsatz (z. B. 4–6 %) und verlängerte Transferzeiten mit reduziertem Methanolgehalt im Transferpuffer verwendet werden, um einen effizienten Transfer zu gewährleisten.
• Für Immunfluoreszenz/Immunozytochemie (IF/ICC): Die Fixierungs- und Permeabilisierungsbedingungen sollten optimiert werden, da ApoB sowohl zytoplasmatisch als auch sezerniert vorliegt; eine Kombination aus Triton X-100-Permeabilisierung und Paraformaldehyd-Fixierung kann effektiv sein.
• Für ELISA: Das rekombinante Immunogen (Aminosäuren 28–330) kann als nützliche Positivkontrolle dienen; erwägen Sie das Testen einer Reihe von Antikörperverdünnungen für ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis.
• Validieren Sie die Kreuzreaktivität des Antikörpers mit Maus- und Rattenproben unter Verwendung geeigneter Gewebe- oder Zelllysate, angesichts der hohen Sequenzhomologie.

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