Anti-APEX1/APE1 polyklonaler Antikörper für WB, IF/ICC, ELISA - P27695

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: APEX1/APE1-Funktion und Lokalisierung

• APEX1 ist ein multifunktionales Protein mit zwei Hauptaktivitäten: DNA-Reparatur über die apurinische/apyrimidinische (AP) Endonuklease-Funktion in der Basenexzisionsreparatur (BER) und Redox-Regulation von Transkriptionsfaktoren wie FOS/JUN (AP-1-Komplex). Verwandte Referenzen: PMID:11118054 PMID:11452037 PMID:15831793
• Die AP-Endonuklease-Aktivität katalysiert den hydrolytischen Einschnitt des Phosphodiester-Rückgrats an AP-Stellen in DNA, DNA/RNA-Hybriden und einzelsträngiger RNA, wodurch ein Einzelstrangbruch mit 5'-Desoxyribosephosphat- und 3'-Hydroxyl-Enden erzeugt wird. Verwandte Referenzen: PMID:15380100 PMID:16617147 PMID:18439621
• Es besitzt 3'-5' Exodesoxyribonuklease-Aktivität auf falsch gepaarten Nukleotiden und DNA-3'-Phosphodiesterase-Aktivität, die oxidative Läsionen wie Phosphoglykolat und 8-Oxoguanin entfernt. Verwandte Referenzen: PMID:11832948 PMID:1719477 PMID:7516064
• APEX1 ist an der Immunglobulin-Klassenwechsel-Rekombination beteiligt, indem es AP-Stellen in Schaltregionen verarbeitet, was zu DNA-Doppelstrangbrüchen führt, die durch nicht-homologe Endverknüpfung gelöst werden.
• Es fungiert als Endoribonuklease, die an der RNA-Qualitätskontrolle und dem mRNA-Umsatz beteiligt ist, einschließlich der Regulation der MYC-mRNA-Stabilität. Verwandte Referenzen: PMID:19188445 PMID:19401441 PMID:21762700
• Das Protein lokalisiert in mehreren subzellulären Kompartimenten: Zellkern (einschließlich Nukleolus und Speckles), Zytoplasma, Mitochondrien und endoplasmatisches Retikulum, was seine vielfältigen Funktionen widerspiegelt.
• Wichtige posttranslationale Modifikationen umfassen Acetylierung, Phosphorylierung, S-Nitrosylierung und Ubiquitinierung; Acetylierung an Lys-6/7 stimuliert die MDR1-Promotoraktivität und trägt zur Arzneimittelresistenz bei. Verwandte Referenzen: PMID:18809583
• APEX1 spielt eine Rolle bei der DNA-Demethylierung und trägt zur epigenetischen Regulation der Genexpression bei. Verwandte Referenzen: PMID:21496894

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein rekombinantes Protein, das die Aminosäuren 1-318 von humanem APEX1 (Vollänge) umspannt, was darauf hindeutet, dass der Antikörper sowohl native als auch denaturierte Formen erkennen kann. Für WB ist eine Bande nahe 36 kDa zu erwarten; verwenden Sie geeignete positive Kontrollen (z.B. HeLa- oder HEK293-Zelllysate) und validieren Sie gegebenenfalls mit siRNA-Knockdown.
• Für IF/ICC ist eine nukleäre und möglicherweise zytoplasmatische oder mitochondriale Färbung zu erwarten. Co-Färbung mit Organellen-Markern (z.B. Lamin für den Zellkern, MitoTracker für Mitochondrien) kann helfen, die Spezifität zu bestätigen.
• Bei ELISA-Anwendungen sollten Sie die Beschichtung mit rekombinantem APEX1-Protein als Standard in Betracht ziehen und über einen Konzentrationsbereich testen, um die Empfindlichkeit zu optimieren.
• Angesichts der Rolle von APEX1 in BER kann der Antikörper nützlich sein, um Veränderungen der Expression unter oxidativem Stress nachzuweisen; schließen Sie relevante Kontrollen (z.B. H₂O₂-behandelte Zellen) ein, um sie mit DNA-Schadensantwortwegen zu korrelieren.
• Die Kreuzreaktivität ist für human validiert; für andere Spezies sollten Sie die Sequenzhomologie überprüfen und Pilotexperimente durchführen.

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