Anti-APAF1 Kaninchen monoklonaler Antikörper für WB und ELISA - O14727

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von APAF1

• APAF1 (Apoptotic protease-activating factor 1), auch bekannt als CED4 oder APAF-1, wird durch das APAF1-Gen (KIAA0413) kodiert und liegt aufgrund von alternativem Spleißen in mehreren Isoformen vor.
• Das Protein fungiert als zentrale Komponente des Apoptosoms, bei dem oligomeres APAF1 die Cytochrom-c-abhängige autoproteolytische Aktivierung von Pro-Caspase-9 vermittelt und anschließend Caspase-3 aktiviert, um die Apoptose auszuführen; dieser Prozess erfordert ATP-Bindung.
• APAF1 ist ein Mehrdomänenprotein mit einer N-terminalen Caspase-Rekrutierungsdomäne (CARD), einer zentralen Nukleotidbindungs- und Oligomerisierungsdomäne (NOD) sowie C-terminalen WD40-Wiederholungsregionen, die für die Cytochrom-c-Bindung entscheidend sind.
• Subzellulär befindet sich APAF1 unter normalen Bedingungen überwiegend im Zytoplasma und wandert nach Induktion der Apoptose zum Apoptosom-Komplex.
• Die Expression ist ubiquitär, mit den höchsten Werten in der Milz des Erwachsenen, peripheren Blutleukozyten, fötalen Gehirn, Niere und Lunge; Isoform 1 kommt spezifisch in Herz, Niere und Leber vor.
• Das Protein unterliegt der ATP/dATP-Bindung und wird wahrscheinlich durch Calcium reguliert, wie die Schlüsselwortassoziationen zeigen, und verfügt über WD-Wiederholungen, die für Protein-Protein-Wechselwirkungen essenziell sind.
• Schlüsselwörter: 3D-Struktur, Alternatives Spleißen, Apoptose, ATP-Bindung, Calcium, Zytoplasma, Direkte Proteinsequenzierung, Nukleotidbindung, Proteomik-Identifizierung, Referenzproteom, Wiederholung, WD-Wiederholung.

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 470-600 des humanen APAF1 (zentrale NOD-Region), was die Detektion von volllängen und verkürzten Varianten gewährleistet, aber die Spezifität sollte in den relevanten Zellmodellen überprüft werden.
• Beim Western Blot ist zu beachten, dass APAF1 aufgrund der Isoformvielfalt und Caspase-Spaltung bei mehreren Molekulargewichten (38-142 kDa) wandert; das Bandenmuster kann je nach Zelltyp und apoptotischem Stimulus variieren.
• ELISA-Anwendungen können mit einer rekombinanten APAF1-Standardkurve entwickelt werden; fügen Sie geeignete Positivkontrollen (z. B. Staurosporin-behandelte Jurkat-Lysate) und Negativkontrollen hinzu, um die Assayspezifität zu validieren.
• Kreuzreaktivität mit Maus-APAF1 wird aufgrund der Sequenzhomologie erwartet, aber eine empirische Bestätigung in Mausgeweben oder Zelllinien wird empfohlen.
• Die Optimierung von Antikörperverdünnung, Inkubationsbedingungen und Detektionsreagenzien wird für jedes experimentelle System empfohlen.

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