Anti-Alpha-2-Makroglobulin (A2M) Kaninchen-polykolonaler Antikörper für WB, ELISA - P01023

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von Alpha-2-Makroglobulin (A2M)

• Alpha-2-Makroglobulin (A2M) ist ein großes Plasmaglykoprotein, das als Breitband-Proteaseinhibitor wirkt und durch einen einzigartigen Mechanismus der Konformationsänderung Proteinasen aus allen vier katalytischen Klassen einfangen kann.
• Das Protein enthält eine „Köderregion“ mit spezifischen Spaltstellen; die proteolytische Spaltung innerhalb dieser Region löst eine umfassende strukturelle Umlagerung aus, durch die die eindringende Protease physisch eingeschlossen wird.
• Nach der Spaltung der Köderregion wird eine interne Thioesterbindung hydrolysiert, wodurch die kovalente Bindung von A2M an die Protease ermöglicht wird. Dadurch wird das Enzym eingeschlossen, während seine Aktivität gegenüber kleinen Substraten erhalten bleibt, der Zugang zu großen Substraten jedoch eingeschränkt wird.
• A2M wird durch das A2M-Gen (Gen-ID: 2) kodiert und gehört zur Alpha-2-Makroglobulin-Familie, zu der auch verwandte Proteine wie PZP (Pregnancy-Zone-Protein) und die Komplementkomponente C3 gehören.
• A2M wird sezerniert und kommt hauptsächlich im Plasma vor, wo es eine wichtige Rolle bei der Regulierung proteolytischer Kaskaden, der Modulation von Entzündungsprozessen und der Aufrechterhaltung der Homöostase spielt.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Disulfidbindungen, N-Glykosylierung und die einzigartige Thioesterbindung, die während des Einfangens der Protease eine Isopeptidverknüpfung bildet.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 1155–1474 des humanen A2M, einer Region, die Teile der Köderregion und der Thioesterdomäne enthalten kann. Forschende sollten in ihren Assaysystemen eine Überprüfung der Reaktivität sowohl mit nativen als auch mit denaturierten Formen in Betracht ziehen.
• Beim Western Blot (WB) kann unter reduzierenden Bedingungen eine Bande bei etwa 163 kDa beobachtet werden. Die Validierung mit positiven und negativen Kontrollen, beispielsweise Plasmaproben von Mensch, Maus oder Ratte, wird empfohlen.
• Für ELISA-Anwendungen kann die Verwendung gepaarter Antikörpersets oder von Sandwich-Formaten geprüft werden. Titrieren Sie den Antikörper sorgfältig, um das Signal-Rausch-Verhältnis zu optimieren.
• Aufgrund der Kreuzreaktivität mit murinem und Ratten-A2M kann dieser Antikörper für translationale Studien geeignet sein. Die artspezifische Sequenzhomologie in der Epitopregion sollte jedoch untersucht werden.

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