Anti-Alkalische Phosphatase (ALPL) Kaninchen-polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA – P05186

Wesentliche Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation der alkalischen Phosphatase (ALPL)

• Die gewebeunspezifische Isoform der alkalischen Phosphatase (ALPL), auch als Leber-/Knochen-/Nieren-Isoform bekannt, liegt aufgrund alternativen Spleißens in mehreren Isoformen vor und wird weitverbreitet in Knochen-, Leber- und Nierengewebe exprimiert.
• Sie spielt eine wesentliche Rolle bei der Mineralisierung von Skelett und Zähnen, indem sie extrazelluläres Diphosphat (PPi), einen starken Hemmstoff der Mineralisierung, zu Phosphat hydrolysiert, wodurch die Bildung von Hydroxylapatitkristallen gefördert und die Konzentration anorganischen Phosphats erhöht wird. Zugehörige Referenzen: PMID:23688511 PMID:25982064
• Sie weist eine breite Substratspezifität auf, jedoch sind nur wenige Substrate natürlich vorkommend, darunter anorganisches Pyrophosphat (PPi), Pyridoxal-5'-phosphat (PLP) und N-Phosphokreatin. Zugehörige Referenzen: PMID:12162492 PMID:2220817
• Sie katalysiert die Dephosphorylierung von Pyridoxal-5'-phosphat (PLP) zu Pyridoxal, der transportierbaren Form von Vitamin B6, die für die Synthese von Neurotransmittern im Gehirn essenziell ist. Zugehörige Referenzen: PMID:20049532 PMID:2220817
• Sie kann mikrobielle Produkte wie Lipopolysaccharide (LPS) und Polyinosin:Polycytidylsäure (Poly I:C) dephosphorylieren und dadurch möglicherweise angeborene Immunantworten modulieren. Zugehörige Referenz: PMID:28448526
• Sie fungiert als wichtiger Regulator der adaptiven Thermogenese im Rahmen des nutzlosen Kreatinzyklus in den Mitochondrien thermogener Fettzellen, indem sie N-Phosphokreatin hydrolysiert und Energie in Form von Wärme abführt, ohne mechanische oder chemische Arbeit zu verrichten.
• Das Protein ist ein glykosyliertes, GPI-verankertes Membranprotein, das Zink- und Magnesium-Kofaktoren benötigt. Es befindet sich in der Zellmembran, der Membran extrazellulärer Vesikel und der Mitochondrienmembran. Mutationen im ALPL-Gen verursachen eine Hypophosphatasie.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 230–440 des humanen ALPL und liegt innerhalb der zentralen Region des reifen Proteins. Da ALPL alternatives Spleißen durchläuft, sollte sichergestellt werden, dass das Epitop in der gewünschten Isoform vorhanden ist.
• Für den Western Blot (WB) beträgt das vorhergesagte Molekulargewicht etwa 57 kDa. Glykosylierung und andere posttranslationale Modifikationen können jedoch dazu führen, dass sich die beobachtete Bande zu einem höheren scheinbaren Molekulargewicht verschiebt. Verwenden Sie Lysate aus Knochen-, Leber- oder Nierengewebe als Positivkontrollen oder Zelllinien, die ALPL überexprimieren.
• Für die Immunhistochemie (IHC-P) sollten die Bedingungen für die Antigen-Demaskierung, beispielsweise die hitzeinduzierte Epitop-Demaskierung, optimiert und die Spezifität der Färbung nach Möglichkeit anhand von ALPL-defizientem oder ALPL-Knockout-Gewebe als Kontrolle validiert werden.
• Für ELISA kann der Antikörper als Fang- oder Nachweisreagenz eingesetzt werden. Titration der Antikörperkonzentrationen gegen rekombinantes ALPL-Protein oder natürliche Proben ermöglicht die Bestimmung optimaler Arbeitsverdünnungen.
• Wie bei jedem polyklonalen Antikörper kann die Leistung zwischen verschiedenen Chargen variieren. Es sollte erwogen werden, neue Chargen im spezifischen experimentellen Kontext zu validieren.

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