Anti-ALG13 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper für WB, ELISA - Q9NP73

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: ALG13-Funktion und -Lokalisierung

• ALG13 ist die katalytische Untereinheit des UDP-N-Acetylglucosamin-Transferase-Komplexes, auch bekannt als Asparagin-verknüpfte Glykosylierung 13-Homolog oder Glycosyltransferase-28-Domain-haltiges Protein 1. Es vermittelt den zweiten Schritt der Dolichol-verknüpften Oligosaccharid-Biosynthese auf der zytoplasmatischen Seite des endoplasmatischen Retikulums.
• Zusammen mit seinem obligaten Partner ALG14 bildet ALG13 einen dimeren Komplex, der ein β1,4-verknüpftes N-Acetylglucosamin (GlcNAc) von UDP-GlcNAc auf GlcNAc-Pyrophosphatdolichol überträgt und N,N′-Diacetylchitobiosyl-diphosphodolichol erzeugt. Dieses Zwischenprodukt wird anschließend durch ALG1 und andere Glycosyltransferasen verlängert.
• Der ALG13/ALG14-Komplex ist an der Membran des endoplasmatischen Retikulums verankert, wo der Dolichol-verknüpfte Oligosaccharid-Vorläufer zusammengesetzt wird, bevor er in das ER-Lumen flippiert wird, um dort weiter verarbeitet und schließlich auf naszierende Polypeptide übertragen zu werden.
• Obwohl es basierend auf Sequenzmotiven (Thiolprotease, Hydrolase-Domänen) als potenzielles multifunktionelles Enzym annotiert ist, wurde außer seiner Rolle bei der GlcNAc-Übertragung keine Glycosyltransferase- oder Deubiquitinase-Aktivität für ALG13 nachgewiesen. Seine zusätzlichen biochemischen Aktivitäten, falls vorhanden, sind schlecht charakterisiert.
• Mutationen im ALG13-Gen sind mit kongenitalen Glykosylierungsstörungen vom Typ Is (CDG1S) und frühinfantilen epileptischen Enzephalopathien (DEE36, EIEE36) verbunden, was die kritische Bedeutung dieses Enzyms für die normale Neuroentwicklung und die globale Protein-N-Glykosylierung widerspiegelt.
• Durch alternatives Spleißen entstehen mehrere ALG13-Isoformen, und das Protein unterliegt der Ubiquitinierung (Ubl-Konjugationsweg), was seine Stabilität oder Funktion regulieren könnte.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das verwendete Immunogen ist ein synthetisches Peptid, das die Reste 100–167 von humanem ALG13 (Isoform NP_001311219.1) umfasst. Dieses Epitop ist im murinen ALG13 konserviert, was die beobachtete Kreuzreaktivität mit Mausproben unterstützt.
• Für Western-Blots validieren Sie die Antikörperspezifität, indem Sie positive Kontrollen wie humane oder murine Zelllinien, die bekanntermaßen ALG13 exprimieren, einbeziehen, und erwägen Sie siRNA-Knockdown- oder Überexpressionsexperimente, um den ~126 kDa-Band zu bestätigen.
• Um den funktionellen ALG13/ALG14-Komplex zu untersuchen, erwägen Sie Co-Immunopräzipitation oder Proximity-Ligation-Assays in Kombination mit dem Nachweis beider Untereinheiten.
• In ELISA-Anwendungen verwenden Sie rekombinantes ALG13-Protein oder das immunisierende Peptid als Beschichtungsantigen, um Standardkurven zu erstellen, und titrieren Sie den Antikörper angemessen für ein optimales Signal-Rausch-Verhältnis.
• Da ALG13 ein membranassoziiertes Protein ist, stellen Sie sicher, dass die Lysepuffer ausreichende Detergenzien (z. B. 1 % Triton X-100 oder NP-40) enthalten, um die ER-Membranfraktion effizient zu solubilisieren.

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