Anti-AKT1/2-Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, IHC, ELISA – P31749 / P31751

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von AKT1/2

• AKT1 ist eine Serin/Threonin-Proteinkinase aus der AKT-Familie, zu der auch AKT2 und AKT3 gehören. Sie fungiert als wichtiger Regulator des Stoffwechsels, der Proliferation, des Zellüberlebens, des Zellwachstums und der Angiogenese (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:15861136). Zugehörige Referenzen: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:15861136
• Es phosphoryliert ein breites Spektrum nachgeschalteter Substrate. Es wurden mehr als 100 Kandidaten identifiziert, obwohl die Isoformspezifität für die meisten nicht eindeutig definiert ist (PubMed:11882383, PubMed:15526160, PubMed:21432781). Zugehörige Referenzen: PMID:11882383, PMID:15526160, PMID:21432781
• In der Insulinsignalübertragung fördert AKT1 die Glukoseaufnahme, indem es die Translokation des GLUT4-Transporters zur Zelloberfläche vermittelt, und reguliert die Glykogensynthese durch Hemmung von GSK3α und GSK3β (nach Ähnlichkeit).
• AKT1 fördert das Zellüberleben durch Phosphorylierung und Hemmung proapoptotischer Faktoren: MAP3K5 an Ser-83 (PubMed:11154276), BAD (PubMed:10926925) und FOXO-Transkriptionsfaktoren, was zu deren Sequestrierung im Zytoplasma führt (PubMed:10358075). Zugehörige Referenzen: PMID:11154276, PMID:10926925, PMID:10358075
• Es ist ein zentraler Bestandteil des PI3K/AKT/mTOR-Signalwegs und aktiviert mTORC1 durch Phosphorylierung von TSC2 (PubMed:12150915, PubMed:12172553) und moduliert die mTORC2-Aktivität durch Phosphorylierung von MAPKAP1/SIN1 (nach Ähnlichkeit). Zugehörige Referenzen: PMID:12150915, PMID:12172553
• AKT1 ist im Zytoplasma, im Zellkern, an der Zellmembran und im mitochondrialen Intermembranraum lokalisiert, was seine Beteiligung an verschiedenen Signalübertragungskompartimenten widerspiegelt.
• Es wird in menschlichen Zellen ubiquitär exprimiert. Eine erhöhte Expression und Aktivierung wird bei Krebsarten wie Prostata- und Brustkrebs beobachtet, wobei die Phosphorylierung an Tyr-176 im Krankheitsverlauf zunimmt.
• Posttranslationale Modifikationen, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Ubiquitinierung und Glykosylierung, regulieren die Aktivität, Stabilität und Wechselwirkungen von AKT1 engmaschig.

Experimentelle Anleitung und technische Hinweise

• Das Immunogenpeptid umfasst die Aminosäuren 381–480 des humanen AKT1 (P31749), eine Region, die voraussichtlich in AKT2 konserviert ist. Daher kann der Antikörper sowohl AKT1 als auch AKT2 erkennen. Es sollte geprüft werden, ob die Isoformspezifität im jeweiligen Versuchssystem gegeben ist.
• Im Western Blot (WB) detektiert der Antikörper eine Bande bei etwa 56 kDa. Validieren Sie das Molekulargewicht anhand von Lysaten positiver Kontrollen (z. B. HeLa, NIH/3T3) und geeigneten Ladekontrollen.
• Bei der Immunhistochemie (IHC-P) ist eine ordnungsgemäße Antigenrückgewinnung sicherzustellen. Validieren Sie die Färbemuster anhand von Gewebeschnitten, die bekanntermaßen AKT1/2 exprimieren, beispielsweise Prostata- oder Brustkrebsgewebe.
• Für ELISA kann zur Entwicklung eines Sandwich-ELISA die Kombination mit einem Detektionsantikörper in Betracht gezogen werden, der gegen ein anderes Epitop gerichtet ist. Optimieren Sie die Bedingungen für Beschichtung und Blockierung.
• Da AKT1/2 bei Aktivierung phosphoryliert werden, kann der Antikörper Gesamt-AKT detektieren. Für aktivierungsspezifische Untersuchungen sollte er mit phosphospezifischen Antikörpern kombiniert werden.

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