Anti-ABCA1-Kaninchen-monoklonaler Antikörper für WB, ELISA - O95477

Zentrale Produktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation von ABCA1

• ABCA1 (ATP-bindende Kassette, Unterfamilie A, Mitglied 1), auch bekannt als ABC-1, CERP und Cholesterinausstrom-regulierendes Protein, ist ein Mitglied der Superfamilie der ATP-bindenden Kassetten- (ABC-)Transporter.
• Es fungiert als Phospholipid-transportierende ATPase und transloziert Phosphatidylcholin und Phosphatidylserin unter ATP-Hydrolyse vom zytoplasmatischen auf den extrazellulären Membranblattring. Diese Aktivität ist für die Übertragung von Phospholipiden auf Apolipoproteine und die Einleitung der Bildung naszenter High-Density-Lipoproteine (HDLs) unerlässlich. Zugehörige Referenzen: PMID:24097981, PMID:35974019
• ABCA1 vermittelt außerdem den Ausstrom von intrazellulärem Cholesterin zu Apolipoproteinen, einen entscheidenden Schritt beim reversen Cholesterintransport und der HDL-Reifung. Zugehörige Referenzen: PMID:10533863, PMID:14754908, PMID:24097981
• ABCA1 ist hauptsächlich an der Zellmembran und in Endosomen lokalisiert und wird weit verbreitet exprimiert, ist jedoch in Makrophagen am häufigsten vorhanden, was seine zentrale Rolle bei der Cholesterinhomöostase von Makrophagen widerspiegelt.
• Zu den posttranslationalen Modifikationen gehören Phosphorylierung (Phosphoprotein) und Palmitoylierung (Lipidierung). Darüber hinaus enthält das Protein Disulfidbrücken und Glykosylierungsstellen, die seine Stabilität und Aktivität regulieren können.
• Aufgrund seiner Funktion im Lipidstoffwechsel ist ABCA1 an Atherosklerose und verwandten kardiovaskulären Erkrankungen beteiligt. Mutationen in ABCA1 werden mit der Tangier-Krankheit und einem familiären HDL-Mangel in Verbindung gebracht.

Experimentelle Hinweise und technische Tipps

• Das Immunogen entspricht den Aminosäuren 1170-1350 innerhalb der C-terminalen Region des menschlichen ABCA1. Diese Region wird als intrazellulär vorhergesagt, und dagegen erzeugte Antikörper können ABCA1 in voller Länge in denaturierenden Western Blots nachweisen. Es sollte eine Validierung der Spezifität in Zelllinien mit bekannter ABCA1-Expression, wie Makrophagen oder Hepatozyten, in Betracht gezogen werden.
• Beim Western Blotting ist das hohe vorhergesagte Molekulargewicht von ABCA1 (~254 kDa) zu beachten. Verwenden Sie Polyacrylamidgele mit einem niedrigen Prozentsatz (z. B. ein 6-%-Gel) und verlängerte Transferzeiten, um einen effizienten Transfer von Proteinen mit hohem Molekulargewicht sicherzustellen. Geeignete Molekulargewichtsmarker sollten eingeschlossen werden.
• Für diesen Antikörper wurde eine Kreuzreaktivität mit ABCA1 von Maus und Ratte berichtet. Bei der Verwendung in diesen Spezies sollte die Reaktivität durch Testen einer Positivkontrolle überprüft werden, beispielsweise von aus Makrophagen gewonnenen Zellen oder Geweben, die bekanntermaßen ABCA1 exprimieren.
• Für ELISA-Anwendungen sollte die Antikörperkonzentration als Fänger- oder Nachweisreagenz optimiert werden. Die Reaktivität des Antikörpers im ELISA kann eine quantitative Messung von ABCA1 in biologischen Proben ermöglichen. Für Sandwich-Formate kann jedoch die Kombination mit einem geeigneten Nachweisantikörper erforderlich sein.

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