Anti-53BP1 Polyklonaler Antikörper für WB, IHC-P, ELISA - Q12888

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung des TP53-bindenden Proteins 1

• 53BP1, auch bekannt als p202, TDRD30 oder p53BP1, ist ein Schlüsselprotein für die Reparatur von Doppelstrangbrüchen (DSB), das an der Reaktion auf DNA-Schäden, der Telomerdynamik und der Klassenwechsel-Rekombination (CSR) während der Antikörpergenese beteiligt ist. Verwandte Referenzen: PMID:12364621 PMID:17190600 PMID:21144835

• Es fördert die durch nicht-homologe Endverbindung (NHEJ) vermittelte Reparatur von DSBs und wirkt spezifisch gegen die BRCA1-abhängige homologe Rekombinationsreparatur (HR). Verwandte Referenzen: PMID:22553214 PMID:23333306 PMID:23727112

• Bei DNA-Schäden fördert die ATM-vermittelte Phosphorylierung von 53BP1 die Wechselwirkung mit RIF1 und die Dissoziation von TIRR, was die Rekrutierung an DSB-Stellen erleichtert. Verwandte Referenzen: PMID:28241136

• 53BP1 wird an DSBs rekrutiert, indem es das an K15 monoubiquitinierte Histon H2A (H2AK15Ub) und das an K20 dimethylierte Histon H4 (H4K20me2) erkennt. Verwandte Referenzen: PMID:17190600 PMID:23760478 PMID:27153538

• Es ist für die Immunglobulin-Klassenwechsel-Rekombination (CSR) erforderlich, einen Prozess, der DNA-DSBs erzeugt. Verwandte Referenzen: PMID:23345425

• 53BP1 fördert auch die NHEJ an dysfunktionalen Telomeren durch Wechselwirkung mit PAXIP1. Verwandte Referenzen: PMID:23727112

• Subzellulär lokalisiert sich 53BP1 im Zellkern, an Chromosomen und spezifisch an Zentromeren und Kinetochoren.

• Alternatives Spleißen erzeugt mehrere 53BP1-Isoformen, was zur funktionellen Vielfalt bei der DNA-Reparatur beiträgt.

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Als polyklonaler Antikörper, der gegen einen rekombinanten Fragment (aa 895-1031) erhoben wurde, wird erwartet, dass er das全长-53BP1-Protein (~214 kDa) und möglicherweise Abbauprodukte im Western Blot erkennt. Optimieren Sie die Belichtungszeit und Ladungskontrollen.
• Für WB wird oft ein typischer Startverdünnungsbereich von 1:500–1:2000 für polyklonale Antikörper verwendet; die optimale Arbeitskonzentration muss jedoch empirisch in Ihrem Probensystem bestimmt werden.
• Bei IHC-P kann aufgrund der nukleären Lokalisierung von 53BP1 eine Antigen-Retrieval erforderlich sein; validieren Sie die Färbespezifität mit geeigneten Gewebekontrollen und erwägen Sie die Verwendung eines nukleären Gegenfärbe-Mittels.
• Der Antikörper zeigt Kreuzreaktivität mit Maus- und Ratten-53BP1, wie vom Lieferanten bestätigt, was ihn für translationswissenschaftliche Studien nützlich macht; jedoch sollte der Sequenzabgleich der Immunogenregion über verschiedene Spezies hinweg berücksichtigt werden.
• Da 53BP1 ein Phosphoprotein ist, das an der DNA-Schadenssignalisierung beteiligt ist, kann die Behandlung von Zellen mit DNA-schädigenden Mitteln (z. B. ionisierende Strahlung, Etoposid) die Erkennung der Fokus-Bildung in der Immunfluoreszenz verbessern oder das Signal im WB modulieren.
• Für ELISA kann der Antikörper verwendet werden, um rekombinante 53BP1-Fragmente oder Zelllysate zu erfassen oder nachzuweisen; geeignete Blockier- und Waschbedingungen sollten optimiert werden.

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