Acetyl-p53-K382 Kaninchen-Polyklonaler Antikörper (P04637) für Dot Blot und ELISA

Kernproduktspezifikationen und -parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisation des zellulären Tumorantigens p53 (TP53)

Das zelluläre Tumorantigen p53 (TP53) ist ein multifunktionaler Transkriptionsfaktor, der eine zentrale Rolle bei der Tumorsuppression spielt, indem es als Reaktion auf zellulären Stress den Zellzyklus stoppt, DNA-Reparatur oder Apoptose induziert. Es fungiert als Wächter des Genoms und reguliert die Zellteilung negativ, indem es die Expression wichtiger Zielgene, einschließlich Inhibitoren von Cyclin-abhängigen Kinasen, kontrolliert. Die p53-vermittelte Apoptose umfasst die Stimulation der BAX- und FAS-Antigenexpression oder die Repression von Bcl-2, und seine pro-apoptotische Aktivität wird durch Interaktionen mit ASPP-Familienproteinen moduliert. Darüber hinaus reguliert p53 die circadiane Uhr, indem es die CLOCK-BMAL1-vermittelte Transkription von PER2 unterdrückt. Verwandte Referenzen: PMID:11025664, PMID:12524540, PMID:12810724, PMID:15340061, PMID:24051492

p53 lokalisiert in Abhängigkeit von seinem Aktivierungszustand und Isoform in mehrere subzelluläre Kompartimente. Es ist überwiegend nukleär, kann aber im Zytoplasma, an PML-Kernkörperchen, Mitochondrien, dem endoplasmatischen Retikulum und dem Zentrosom gefunden werden. Die Translokation zu Mitochondrien erfolgt unter oxidativem Stress oder Mitomycin-C-Behandlung, wo p53 mit PPIF kooperiert, um Nekrose zu aktivieren. Verwandte Referenzen: PMID:15340061, PMID:17170702, PMID:11025664, PMID:12810724, PMID:22726440, PMID:27323408, PMID:28842590

p53 wird ubiquitär exprimiert, aber seine Isoformen zeigen gewebeabhängige Variationen. Isoform 2 fehlt in Gehirn, Lunge und Prostata, während Isoform 8 auf Dickdarm, Knochenmark, Hoden, fötales Gehirn und Darm beschränkt ist. Verwandte Referenzen: PMID:16131611

p53 unterliegt umfangreichen posttranslationalen Modifikationen, die seine Stabilität und Aktivität regulieren. Die Acetylierung an Lysin 382 (K382) wird durch Acetyltransferasen wie p300/CBP vermittelt und verstärkt die p53-DNA-Bindung und transkriptionelle Aktivierung. Diese Modifikation kann durch Deacetylasen rückgängig gemacht werden, und K382 kann auch methyliert oder dimethyliert werden, was ein komplexes regulatorisches Netzwerk verdeutlicht. Verwandte Referenzen: PMID:10656795, PMID:15448695, PMID:20228809, PMID:23431171, PMID:29681526, PMID:19608861, PMID:17707234, PMID:20870725, PMID:22864287

Experimentelle Anleitung und technische Tipps

• Das Immunogen ist ein synthetisches acetyliertes Peptid, das den Regionen um K382 von humanem p53 entspricht. Es wird erwartet, dass der Antikörper spezifisch die acetylierte Form erkennt; Kreuzreaktivität mit unmodifiziertem Peptid oder anderen Modifikationen an dieser Stelle sollte getestet werden.
• Für Dot-Blot-Anwendungen sollten denaturierte Proteinproben oder auf Membranen aufgetragene Peptide verwendet werden. Für ELISA kann die Beschichtung mit dem Immunogenpeptid oder dem p53-Vollproteinfragment geeignet sein.
• Da polyklonale Antikörper von Charge zu Charge variieren können, validieren Sie die Spezifität des Antikörpers in Ihrem experimentellen System mit geeigneten Kontrollen (z. B. Wettbewerb mit nicht-acetyliertem Peptid oder Lysaten von Zellen, die mit Deacetylase-Inhibitoren wie Trichostatin A behandelt wurden).
• Die Induktion der p53-Acetylierung kann durch Behandlung von Zellen mit DNA-schädigenden Mitteln (z. B. Doxorubicin, Etoposid) vor der Probenvorbereitung erreicht werden.
• Der Antikörper wird auf Eisbeuteln versandt. Nach Erhalt aliquotieren und bei –20°C oder niedriger zur langfristigen Stabilität lagern. Vermeiden Sie wiederholte Gefrier-Tau-Zyklen.

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