Acetyl-p53 (K370) Kaninchen-monoklonaler Antikörper (P04637) für Western Blot und ELISA

Kernproduktspezifikationen und Parameter

Biologischer Hintergrund: Funktion und Lokalisierung von p53 (TP53)

p53 (Zelluläres Tumorantigen p53, TP53) ist ein gut charakterisiertes Tumorsuppressorprotein, das als multifunktionaler Transkriptionsfaktor wirkt. Es induziert Zellzyklusarrest, DNA-Reparatur oder Apoptose nach Bindung an seine Ziel-DNA-Sequenzen und erhält dadurch die genomische Stabilität sowie verhindert die Krebsentstehung (PubMed:11025664, 12524540, 12810724, 15340061, 17317671, 24051492).

Verwandte Referenzen: PMID:11025664, PMID:12524540, PMID:12810724, PMID:15340061, PMID:17317671, PMID:24051492

Untersuchungen zur subzellulären Lokalisierung zeigen, dass p53 unter normalen Bedingungen überwiegend im Kern vorliegt, aber als Reaktion auf verschiedene zelluläre Stresssituationen in das Cytoplasma, die Mitochondrien, PML-Körperchen und das Endoplasmatische Retikulum translozieren kann. Diese dynamische Kompartimentierung ist entscheidend für seine vielfältigen Funktionen, einschließlich der Transkriptionsregulation und der Induktion der Apoptose (PubMed:15340061, 22726440, 11025664, 12810724, 17170702, 25168243, 27323408, 28842590).

Verwandte Referenzen: PMID:15340061, PMID:22726440, PMID:11025664, PMID:12810724, PMID:17170702, PMID:25168243, PMID:27323408, PMID:28842590

p53 wird in den meisten Geweben ubiquität exprimiert, wobei mehrere Isoformen unterschiedliche Expressionsmuster aufweisen. Die Hauptisoform 1 ist breit exprimiert, während andere Isoformen gewebespezifisch vorhanden oder abwesend sind, was eine zusätzliche regulatorische Komplexität hinzufügt (PubMed:16131611).

Verwandte Referenzen: PMID:16131611

Die Aktivität von p53 wird streng durch umfangreiche posttranslationale Modifikationen (PTM) kontrolliert, einschließlich Phosphorylierung, Acetylierung, Methylierung und Ubiquitinierung. Lysin 370 (K370) in der C-terminalen regulatorischen Domäne ist ein Hotspot für solche Modifikationen und wird durch Enzyme wie SMYD2 und andere methyliert und di-methyliert, was die Stabilität und transkriptionelle Aktivität von p53 moduliert. Dieser Antikörper wurde unter Verwendung eines synthetischen acetylierten Peptids im Bereich von K370 des humanen p53 (P04637) hergestellt und erkennt spezifisch die acetylierte Form an dieser Position. Die Acetylierung an K370 ist mit einer verstärkten DNA-Bindung und Aktivierung von p53-Zielgenen verbunden, wodurch sie mit der Tumorsuppression verknüpft ist.

Verwandte Referenzen: PMID:17108971, PMID:22864287 (Für Methylierung/Dimethylierung an K370)

Experimentelle Anleitung und Technische Tipps

• Der Antikörper wurde in Kaninchen gewonnen und ist monoklonal, was eine hohe Spezifität und Konsistenz über alle Chargen hinweg gewährleistet.
• Für das Western Blotting sollten Sie nukleäre Proteinextrakte anreichern, da p53 überwiegend im Kern vorliegt; abhängig von zellulären Stressbedingungen kann p53 aber auch in cytoplasmatischen oder mitochondrialen Fraktionen vorhanden sein.
• Validieren Sie die Antikörperleistung in Positivkontrollproben, von denen bekannt ist, dass sie acetyliertes p53 exprimieren – wie Zellen, die mit Deacetylase-Inhibitoren (z. B. Trichostatin A oder Nicotinamid) oder DNA-schädigenden Agenzien (z. B. Etoposid, Doxorubicin) behandelt wurden.
• Bei Verwendung von ELISA beschichten Sie die Platte mit dem Immunogenpeptid (acetyliert) und einem nicht-acetylierten Kontrollpeptid, um die Spezifität zu bestätigen.
• Die Kreuzreaktivität ist für Mensch und Maus bestätigt, berücksichtigen Sie aber eine Sequenzalignment bei Tests mit anderen Spezies.
• Optimieren Sie die Arbeitsverdampfung empirisch; empfohlene Startverdünnungen für WB: 1:500‑1:2000, für ELISA: 1:1000‑1:5000 (müssen vom Endnutzer titriert werden).

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